小鼠抗红细胞抗体elisa试剂盒样本处理及要求和操作步骤

小鼠抗红细胞抗体elisa试剂盒  样本处理及要求：

1.  血清：室温血液自然凝固  10-20  分钟，离心  20  分钟左右（2000-3000  转/分）  。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.  血浆：应根据标本的要求选择  EDTA  或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合  10-20  分钟后，离心 20  分钟左右（2000-3000  转/分）  。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.  尿液：用无菌管收集，离心  20  分钟左右（2000-3000  转/分）  。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.  细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心  20  分钟左右（2000-3000

转/分）  。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用  PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到  100  万/ml  左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心  20  分钟左右（2000-3000  转/分）  。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5.  组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的  PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保

存备用。标本融化后仍然保持  2-8℃的温度。加入一定量的  PBS（PH7.4）  ，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心  20  分钟左右（2000-3000  转/分）  。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6.  标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7.  不能检测含  NaN3  的样品，因  NaN3  抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

小鼠抗红细胞抗体elisa试剂盒   操作步骤：

1. 标准品：其浓度为160IU/L（贮液)。先将其稀释为160IU/L(标准曲线高浓度)后，再准备5个稀释标准品的EP管，每个EP 管中加入150μL 的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成160IU/L，80IU/L，40IU/L，20IU/L，10IU/L，5IU/L，标准品稀释液(0IU/L)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液

Tube

0

1

2

3

4

5

IU/L

160IU/L

80IU/L

40IU/L

20IU/L

10IU/L

5IU/L

2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）  、待

测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液  40μ l，然后再加待测样品  10μ l（样品终稀释度为  5  倍）   。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.  温育：用封板膜封板后置  37℃温育  30  分钟。

4.  配液：将  20  倍浓缩洗涤液用蒸馏水  20  倍稀释后备用。

5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置  30  秒后弃去，

如此重复  5  次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶标试剂  50μ l，空白孔除外。

7.  温育：操作同  3。

8.  洗涤：操作同  5。

9.  显色：每孔先加入显色剂  A50μ l，再加入显色剂  B50μ l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15  分钟.

10.  终止：每孔加终止液  50μ l，终止反应（此时蓝色立转黄色）  。

11.  测定：以空白空调零，450nm  波长依序测量各孔的吸光度（OD  值）  。 测定应

在加终止液后  15  分钟以内进行。

注意事项：

1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡  15-30  分钟后方可使用，酶标包被板开封后

如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间

控制在  5  分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本  OD

值大于标准品孔孔的  OD  值）  ，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n  倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）  。

5．  封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．  底物请避光保存。

7．  严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8．  所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．  本试剂不同批号组分不得混用。