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| 货号 | FS-X9735 |
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培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：Caspase-6活性测定试剂盒
英文名称：Caspase-6 Activity colorimetric assay Kit
产品规格：20T|50T|100T
货号：FS-X9735
产品介绍:
本试剂盒测定哺乳动物组织、细胞caspase-6活性。试剂盒测定原理基于Caspase-6特异水解其多肽底物Ac-VEID-pNA(N-acetyl-Val-Glu-Ile-Asp-p-nitroanilide)，释放出游离的硝基pNA，后者呈黄色在405nm具有大吸收峰，用可见光分光光度比色方法测定。其吸光度值对应于Caspase-6的水解活性。 Caspase-6也称Mch-2，其前体蛋白被granzyme B剪切后形成活化的caspase-6二聚体，可诱导细胞凋亡。细胞凋亡属于程序化细胞死亡，可见于各种器官和细胞，在正常发育、生理、病理过程中对细胞和器官的稳态具有十分重要的调节作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含10多个成员。Caspase-6也称Mch-2，其前体蛋白被granzyme B剪切后形成活化的caspase-6二聚体，可诱导细胞凋亡。Caspase-6可剪切凋亡的关键调节蛋白PARP，剪切核膜上关键蛋白Lamin A，其对于Lamin A的识别位点是VEID。 运输及保存：试剂常温运输。到达后按要求储存，1年内稳定。 |
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
III型前胶原基末端肽(PⅢNP)英文名：PⅢNP Bcl2相互作用蛋白1抗体（转化相关基因8蛋白）包装100g
G蛋白偶联胆汁受体1(GPBAR1)英文名：GPBAR1 骨形态发生蛋白5抗体包装25g
GATA结合蛋白4(GATA4)英文名：GATA4 骨形态发生蛋白15抗体包装1g
FMS样酪激3配体(Flt3L)英文名：Flt3L Bcl-2样蛋白2抗体包装250mg
FMS样酪激3(Flt3)英文名：Flt3 杀菌/通透性增强蛋白抗体包装5g
FAM84A蛋白(FAM84A)英文名：FAM84A Bcl-2抗体包装25g
FAM172A蛋白(FAM172A)英文名：FAM172A 脑转录因子4蛋白抗体包装5g
E选择(E-Selectin/CD62E)英文名：E-Selectin/CD62E 胆盐激活脂肪抗体包装1mg
E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)英文名：E-Cad 3-羟丁脱氢抗体包装25g
E3泛蛋白连接TRIM68(TRIM68)英文名：TRIM68 长链脂肪酰基解抗体包装5g
D-乳脱氢(D-LDH)英文名：D-LDH 磷化癌易感基因1抗体包装10mg
D二聚体(D2D)英文名：D2D 磷化β分泌抗体包装50mg
DNA(胞嘧啶-5)基转移3B(DNMT3B)英文名：DNMT3B 磷化相关死亡促进因子抗体包装1g
DNA(胞嘧啶-5)基转移3A(DNMT3A)英文名：DNMT3A 磷化相关死亡促进因子抗体包装25g
DNA(胞嘧啶-5)基转移1(DNMT1)英文名：DNMT1 磷化Bcl-2抗体包装5g
芳香乙酰脱乙酰基样蛋白2抗体肝核因子1β(HNF1β)LCL161 is an orally bioavailable second mitochondrial-derived activator of caspa
Caspase-6活性测定试剂盒ATCC 10211 氧基硅醌氧化还原1
斜顶 4-二基丁缩二甲赖氨酰氧化
相思根瘤 2-(基硅基)噻吩蛋白激
聚贪氏 3,5-二叔丁基水杨酸酪蛋白激受体A2
枯草芽孢杆 对甲草酸二酯酪酸蛋白激受体A7抗体
Nocardioides 4-乙氧基-1-萘甲酸酪
非脱羧勒克 N-叔丁氧羰基-5-溴酪酸激2
枯草芽孢杆 2,8-二甲基-2,3,4,5-四氢-1H-吡啶并[4,3-b]酪酸激受体
球孢白僵 6-羟基吡啶-2-羧酸
赭色掷孢酵母 9,9-二辛基芴-2,7-双(酸频哪酯)酪酸羟化
酿酒酵母 N-环戊基甘甲酯盐酸盐酪氨酰DNA 磷酸二酯1
美澳型核果褐腐病 邻苄氧苯酪酪肽；多肽YY
耶纳农球 4,6-二甲基-2-庚酮雷帕霉靶蛋白
枯草芽孢杆 3,4-二羟基噻吩-2,5-二羧酸二乙酯类白抗原C
Bacillus tequilensis 4--3-盐酸盐类风湿因子
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
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