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货号 | FS-X10971 |
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产品介绍:
Ispinesib(SB-715992)是高亲和性的KSP(HsEg5)特异性抑制剂,Ki为1.7nM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! 号:336113-53-2 别名:SB-715992 纯度:98.40% 分子量:517.06 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
中文名称:KSP(HsEg5)特异性抑制剂(Ispinesib)
英文名称:Ispinesib
产品规格:1mL(10mM)|10mg|50mg
货号:FS-X10971
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
红曲红曲人α乳清蛋白Escherichia coli小鼠热休克蛋白90(HSP-90)
干巴革菌人N-乙酰基-丝酰-天门冬酰-赖酰-脯Escherichia coli小鼠热休克蛋白70(HSP-70)
蝇卷霉人乳铁传递蛋白/乳铁蛋白Escherichia coli小鼠热休克蛋白70(HSP-70)
产短杆菌人脑红蛋白Escherichia coli小鼠脂联(ADP)
类阿达青霉人的牛血清白蛋白残留检测Escherichia coli小鼠脂联(ADP)
根瘤菌人β淀粉样蛋白1-40Escherichia coli小鼠热休克蛋白40(Hsp-40)
枯草芽孢杆菌人髓磷脂碱性蛋白Escherichia coli小鼠热休克蛋白40(Hsp-40)
酿酒酵母人高迁移率族蛋白B1Escherichia coli小鼠β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)
苍白盐八叠球菌人结蛋白Escherichia coli小鼠β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)
疏毛盘多毛孢人S0蛋白Escherichia coli小鼠白介8(IL-8/CXCL8)
蜡样芽孢杆菌人S0B蛋白Escherichia coli小鼠白介8(IL-8/CXCL8)
根瘤菌人巨噬炎性蛋白2Escherichia coli小鼠周期D3(Cyclin-D3)
球拟圆酵母人凝胶原蛋白Escherichia coli小鼠周期D3(Cyclin-D3)
鼎湖鳞伞(只能确定到属)人踝蛋白Escherichia coli小鼠周期D2(Cyclin-D2)
谢瓦曲霉人角化内分泌因子Escherichia coli小鼠周期D2(Cyclin-D2)
鸭瘟病抗血清人氧化低密度脂蛋白Escherichia coli小鼠雌激(E)
NADPH氧化2抗体褐环粘盖牛肝菌人气道上皮细胞
9号染色体开放阅读框156抗体东方栓菌仓鼠卵巢细胞(二氢叶还原缺陷)
细胞粘附分子3抗体脊髓灰质炎受体相关蛋白3淡色丛赤壳小鼠胰岛β细胞
核因子活化T细胞胞浆蛋白2抗体真姬离褶伞人中性粒细胞
KSP(HsEg5)特异性抑制剂(Ispinesib)马腺疫链球兽疫亚种 Curcolonol甘油二酯O-酰基转移
小单孢 Dihydrocurcumenone二酰基甘油酰基转移1
寄生曲霉 Isosalviamine B二酰基甘油酰基转移2
类芽胞杆 Isosalviamine A甘油-3-磷酰基转移
面包乳杆 Isovallesiachotamine神经激肽A
鸭疫里氏杆 Vallesiachotamine6-磷果糖激
粉红单端孢 Moellendorffilin钠磷转运蛋白
寡发酵链球 Salviananp38丝裂原活化蛋白激
*花椒褐斑病 Isoanthricin色C
栗疫 Zedoarofuran6-磷葡萄糖脱氢
暗孢节菱孢 Rubinaphthin A雌受体α
枣叶枯橄榄色盾壳霉 Neobritannilactone Bβ-胡萝卜羟化
雷夫松氏 Ivangustinβ-胡萝卜酮化
枯草芽孢杆 Bisisorhapontigenin A9-顺式环氧类胡萝卜单加氧
聚生壳 Triptotin F9-顺式环氧类胡萝卜双加氧
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