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| 货号 | FS-01S63219 |
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产品名称：NADPMDHNADP苹果酸脱氢酶检测试剂盒紫外分光光度法
规格：50管/48样
检测方法：紫外分光光度法
货号：FS-01S63219
商品介绍：
测定意义 MDH （EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物， 连接多条重要的代谢途径。因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH， NADP-MDH主要存在于真核细胞中。 测定原理： NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。 |
操作步骤:
实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。 3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。 4. 每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。 5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。 6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。 7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。 8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。 |
粗酶液提取：
1、细胞或组织样品的制备： 培养细胞：先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），超声波破碎细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2、血清（浆）样品：直接检测。 |
试剂的组成和配制：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 200μL×1 支，4℃保存；
试剂三：液体 4mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：粉剂×2 瓶，4℃保存。
猪载脂蛋白C3(ApoC3)联免疫试剂盒 LuteolibacterPdx1 (D59H3) XP® Rabbit mAb
猪血管紧张II (ANG II)联免疫试剂盒 小叶相思根瘤Pdx1 (D59H3) XP® Rabbit mAb
猪肾小球组织糖基化终末产物(GTEAGE)联免疫试剂盒 类诺卡氏属IWS1 Antibody
猪N-乙酰β-D-基葡萄糖苷(NAGase)联免疫试剂盒梭属MEF2D Antibody
猪解整合金属蛋白10(ADAM10)联免疫试剂盒 苏云金芽胞杆亚亚种HSP60 (D6F1) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)
猪脱氧核糖核I(DNase-I)联免疫试剂盒 丛毛红曲PERK (D11A8) Rabbit mAb
猪Ⅲ型胶原(COL3)联免疫试剂盒 东方伊萨酵母PERK (D11A8) Rabbit mAb
猪雷帕霉靶蛋白(mTOR)联免疫试剂盒 酿酒酵母EAAT1 (D44E2) XP® Rabbit mAb
猪促睡眠肽α(δSIP-α)联免疫试剂盒 蜡样芽孢杆EAAT1 (D44E2) XP® Rabbit mAb
猪甘露聚糖结合凝集相关丝蛋白1(MASP1)联免疫试剂盒 禽白血病病α-Smooth Muscle Actin (1A4) Mouse mAb (IHC Formulated)
猪CCAAT增强子结合蛋白δ(C/EBPδ)联免疫试剂盒 淡紫青霉EAAT1 (D20D5) Rabbit mAb
猪C型钠尿肽(CNP)联免疫试剂盒 印度芽孢杆PPP2R4 (5G3) Mouse mAb
猪普列克底物蛋白同源物样结构域家族A成员2(PHLDA2)联免疫试剂盒洋葱伯克霍尔德氏PPP2R5D (H5D12) Mouse mAb
猪粘蛋白5B(MUC5B)联免疫试剂盒绒毛栓PPP2R2A (2G9) Mouse mAb
猪XV 型胶原(COL15)联免疫试剂盒 酮丁梭PPP2R2A (2G9) Mouse mAb
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