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| 货号 | FS-X9740 |
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培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称：Caspase-1活性测定试剂盒
英文名称：Caspase 1 Activity colorimetric assay Kit
产品规格：20T|50T|100T
货号：FS-X9740
产品介绍:
本试剂盒适用于测定哺乳动物组织、细胞caspase-1活性。测定原理基于Caspase-1特异水解其多肽底物N-acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp-pNA(Ac-YVAD-pNA)，释放出游离的硝基pNA，后者呈黄色在405nm具有大吸收峰，用可见光分光光度比色方法测定。其吸光度值对应于Caspase-1的水解活性。 细胞凋亡属于程序化细胞死亡，可见于各种器官和细胞，在正常发育、生理、病理过程中对细胞和器官的稳态具有十分重要的调节作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含10多个成员。其中Caspase-1是可剪切IL-1b和IL-18前体产生活性细胞因子的caspase。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前体蛋白产生20kD和10kD片断，这两个片断可以形成异源二聚体，并进一步形成四聚体。此四聚体具有蛋白酶活性。Caspase-1通过剪切Bcl-XL调节细胞凋亡，并通过对细胞因子前体的剪切来调控相关细胞因子介导的免疫炎性反应。 运输及保存：试剂常温运输。到达后按要求储存，1年内稳定。 所需仪器：酶标仪与96孔酶标板；或可见光分光光度计配100μl容积的石英比色杯。 工作波长：大吸收波长405nm，如不具备也可在400～450nm范围内测定，但灵敏度略降。 |
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
25羟基维生D3(25(OH)D3/25 HVD3)英文名：25(OH)D3/25 HVD3 Bcl2样凋亡蛋白14抗体包装5g
25羟基维生D3(25 HVD3)英文名：25 HVD3 Bcl2蛋白修饰因子抗体包装1g
25羟基胆固(25-OHC)英文名：25-OHC 骨形态发生蛋白11抗体包装5g
20S蛋白体(20SP)英文名：20SP BCL2样15促凋亡蛋白抗体包装25g
17-类固(17-KS)英文名：17-KS 骨碱性磷抗体包装100g
17羟孕(17-OHP)英文名：17-OHP 磷化T淋巴连接蛋白抗体包装25g
17羟皮质类固(17-OHCS)英文名：17-OHCS 磷化T淋巴连接蛋白抗体包装500g
17-α睾(17-αMT)英文名：17-αMT 脑纳前体抗体包装10MG
16α羟基雌1(16-α OHE-1)英文名：16-α OHE-1 脑纳前体抗体包装100mL
15脂加氧(15-LO/LOX)英文名：15-LO/LOX 骨髓基质干抗原1抗体包装25mL
12羟二十烷四烯(12-HETE)英文名：12-HETE 磷化蛋白酪激ATK抗体包装1g
1,4,5-三磷肌(IP3)英文名：IP3 磷化蛋白酪激ATK抗体包装5g
1,3-βD葡葡糖苷(1,3-βD-Glu)英文名：1,3-βD-Glu 磷化相关死亡促进因子抗体包装100ml
1,25二羟基维生D3(1,25 DHVD3)英文名：1,25 DHVD3 磷化死亡调解子抗体包装1g
组织蛋白B(CTSB)英文名：CTSB 磷化死亡调解子抗体包装250mg
甘油酯激线粒体抗体基质金属蛋白3(MMP3)PTZ-343 is a phenothiazine derivative with chemical name: sodium 3-(10H-phenothi
Caspase-1活性测定试剂盒果形正青霉 柠檬酸甜菜碱麻疹病IgG抗体
假结核耶尔森氏 4-频哪酯毛球族同族体1
土地杆 3,5-二氟-4-溴苯毛球族同族体2
哈茨木霉 4-甲氧基苯基酸频那酯毛球族同族体3
曲霉 4-基-3-氟门
美澳型核果褐腐病 1,8-二溴萘门冬酰
腐皮壳 3,4,5-三溴吡唑锰超氧化物歧化
绿色链霉 2-氟-5-吡啶球蛋白A
微小杆 5-靛红球蛋白A1
灵芝 4-溴-2-甲氧基苄球蛋白D
水溶性非食用色快速筛查盒 3,5-双(叔丁基)苯甲球蛋白E
蝉拟青霉 2-氟-4-酸球蛋白E Fc段受体Ⅰ
高地芽孢杆 2-基-4-硝基-6-溴苯球蛋白G
平菇 (S)-(-)-b-乙球蛋白G1
蜡样芽孢杆 反式-肉桂酰球蛋白G2
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
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