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RET激酶抑制剂(AST 487)

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所  在  地上海市

更新时间:2022-05-24 15:22:01浏览次数:175次

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货号 FS-X11057
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产品介绍:

AST487是一种RET激酶抑制剂,IC50为880nM,抑制RET自磷酸化,及下游效应器激活,也抑制Flt-3,IC50为520nM。

注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途!

号:630124-46-8

别名:NVP-AST 487

纯度:98.64%

分子量:529.56

储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

中文名称:RET激酶抑制剂(AST 487)

英文名称:AST 487

产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

货号:FS-X11057

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。

8、结果分析

a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

培养操作步骤:

1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

线粒体DNA拓普西异构meiⅠ抗体 MT

CD90抗体 CD90 / Thy1

突触融合蛋白结合蛋白5抗体 Tomosyn/STXBP5

UNC80蛋白抗体 UNC80

四分子交联体4抗体(四旋蛋白) TSPAN4

转录因子Tbx18抗体 TBX18

干燥综合征相关蛋白2抗体 TROVE-2

jia状腺激su受体相互作用蛋白4抗体 TRIP4

转录因子E2F二聚体蛋白2抗体 TFDP2

TIP30蛋白抗体 TIP30

β-taxilin蛋白抗体 TXLNB

酪蛋白硫suan转移mei1抗体 TPST1
RET激酶抑制剂(AST 487)薏苡链格孢 Sarcandrolide D

球形赖芽孢杆 Rauvotetraphylline E

产单核李氏杆 Raucaffricine

大豆慢生根瘤 Protoplumericin A

黑腐皮壳 霹雳萝芙辛碱

南海红球 Ocotillone

猪丹丝 蕊木碱甲酯

姬松茸* 辛夷烯酮

匍枝根霉(黑根霉) 7-Geranyloxy-5-methoxycoumarin

黄曲霉 Larixinol

香菇 Jolkinol A

橙色盐单胞 2,5,14-三乙酰氧基-3-苯甲酰基氧基-8,15-二羟基-7-异丁酰氧基-9-烟酰氧基氧基-6(

彩色豆马勃 Isokadsurenin D

鼠李糖乳杆 Isoerysenegalensein E

桤木链霉 Erysenegalensein E

 


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