小鼠精原细胞系 返回列表页

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

产品属于：

产品名称：小鼠精原细胞系    

产品英文：GC-1 spg

货号：FS-01X9636

细胞培养条件：DMEM+10%FBS+1%P/S

生长状态：贴壁生长

产品规格：1×106

单位：T25/瓶

是否提供细胞STR鉴定：不提供STR鉴定报告

保存培养温度（℃）37

运输温度（℃）：常温   

细胞培养的优点：

注意事项：

人血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒 Human Vascuolar cell adhesion molecule 1，VCAM-1 ELISA Kit

人肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒Human Tumor necrosis factor β，TNF-β ELISA Kit

人肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒 Human Tumor necrosis factor α，TNF-α ELISA Kit

人转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒Human Transforming Growth factor β1，TGF-β1 ELISA Kit

人转化生长因子α(TGF-α)ELISA试剂盒Human transforming growth factor α，TGF-α ELISA Kit

人干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)ELISA试剂盒Human Stem cell factor/mast cell growth factor，SCF/MGF ELISA Kit

人可溶性CD40配体(sCD40L)ELISA试剂盒 Human Soluble Cluster of differentiation 40 ligand，sCD40L ELISA Kit

人可溶性CD30配体(sCD30L)ELISA试剂盒 Human Soluble Cluster of differentiation 30 ligand，sCD30L ELISA Kit

人P选择素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA试剂盒Human P-Selectin/CD62P/GMP140 ELISA Kit

人血血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA试剂盒Human Platelet-Derived Growth Factor AB，PDGF-AB ELISA Kit

人血血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)ELISA试剂盒Human Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α，PDGFsR-α ELISA Kit

人巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒Human Macrophage-Derived Chemokine，MDC ELISA Kit

人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA试剂盒Human Macrophage Colony-Stimulating Factor，M-CSF ELISA Kit

人L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒Human L-Selectin ELISA Kit

人白介素9(IL-9)ELISA试剂盒Human Interleukin 9，IL-9 ELISA Kit

人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒 Human Interleukin 8，IL-8 ELISA Kit

人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒 Human Interleukin 6，IL-6 ELISA Kit

人白介素-5(IL-5)ELISA试剂盒Human Interleukin 5，IL-5 ELISA Kit

人白介素4(IL-4)ELISA试剂盒Human Interleukin 4，IL-4 ELISA Kit
小鼠精原细胞系GAPDH(3E12)-Loading Control  3-磷酸甘油醛脱氢酶单克隆抗体(内参抗体) 0.1ml

GAPDH   3-磷酸甘油醛脱氢酶抗体(内参抗体) 0.1ml

beta-Actin (Loading Control)  β-肌动蛋白抗体（内参抗体） 0.1ml

14-3-3(Alpha/Beta/Gamma/Delta/Epsilon)  14-3-3蛋白抗体 0.1ml

phospho-14-3-3 protein zeta/delta(Ser58)  磷酸化14-3-3 α/β/ζ抗体 0.1ml

14-3-3 family protein  苹果14-3-3蛋白抗体(植物) 1ml

GLI1/Zfp5  脑胶质瘤相关蛋白抗体（锌指蛋白5） 0.1ml

Involucrin  囊包蛋白/内披蛋白抗体 0.2ml
实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。