当前位置:上海抚生实业有限公司>>生化检测试剂盒>>光合作用系列>> Rubisco二磷酸核酮糖羧化酶微量法
货号 | FS-01S63880 |
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商品介绍:
测定意义 核酮糖-1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶(Rubisco, EC 4.1.1.39)是植物光合作用中的一个关键酶,既控制着CO2的固定,同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流,其活性的大小直接影响着光合速率。 测定原理: (1)在Rubisco的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)与1分子的CO2结合,产生2分子的3-磷酸甘油酸(PGA);(2)PGA可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用,产生甘油醛-3-磷酸,伴随着NADH氧化生成NAD+;(3)在340 nm NADH有特征吸收峰,而NAD+没有此吸收峰,因此测定340nm吸光度下降速率可以代表Rubisco的羧化酶活性。 需自备的仪器和用品: 可见-紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 |
试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 200μL×1 支,4℃保存;
试剂三:液体 4mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×2 瓶,4℃保存。
公司产品仅用于科研提供的生化试剂盒,质量信得过产品,售后完善。服务于高校及免疫学科研单位,竭诚为您提供更周到的服务更优质的产品。
规格:100管/96样
检测方法:微量法
货号:FS-01S63880
操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。 1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。 3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。 4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。 5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。 6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。 7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。 8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。 |
粗酶液提取:
1、细胞或组织样品的制备: 培养细胞:先收集细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),超声波破碎细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 2、血清(浆)样品:直接检测。 |
ANKS1A 锚蛋白重复及SAM结构域蛋白1A抗体 * 0.2ml
APOL3 载脂蛋白L3抗体 * 0.2ml
ARMC3 (Cancer/testis antigen 81) 肿瘤/抗原81抗体 * 0.2ml
ARSA 芳香基硫酯1抗体 * 0.2ml
ATE1 精tRNA的蛋白转移1抗体 * 0.2ml
ATX2 脊髓小脑共济失调2型蛋白抗体 * 0.2ml
ATXN7L1 共济失调蛋白7样1抗体 * 0.2ml
ATXN7L2 共济失调蛋白7样2抗体 * 0.2ml
BCNP B细胞新型蛋白1抗体 * 0.2ml
BEX4 脑表达X连锁蛋白4抗体 * 0.2ml
ABCA5 三磷腺苷结合盒转运蛋白A亚基5抗体 * 0.2ml
BTBD7 BTB/POZ结构域蛋白7抗体 * 0.2ml
GUSB/beta glucuronidase β葡萄糖醛苷抗体 * 0.2ml
CA13 * 0.2ml
HOXC9 同源盒蛋白HOXC9抗体 * 0.2ml
Rubisco二磷酸核酮糖羧化酶检测试剂盒微量法小鼠胃动Anti-POLE AntibodyP21蛋白检测试剂盒
大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉辅因子Anti-POLE Antibodyp53自身抗体检测试剂盒
大鼠纤溶抗纤溶复合物Anti-POLG2 AntibodyPeriostin检测试剂盒
小鼠生长抑Anti-POLE4 Antibody前颗粒体蛋白检测试剂盒
人周期D1Anti-POLK Antibody有凸1检测试剂盒
人内皮抑Anti-POLI Antibody磷化tau—181蛋白检测试剂盒
小鼠血纤蛋白原Anti-POLR1B AntibodyPTEN;MMAC1检测试剂盒
大鼠凝血抗凝血复合物Anti-POLQ AntibodyP糖蛋白;渗透性糖蛋白检测试剂盒
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