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货号 | FS-X10959 |
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培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称:小分子抑制剂(Sitravatinib)
英文名称:Sitravatinib
产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
货号:FS-X10959
产品介绍:
Sitravatinib是一个新颖的小分子抑制剂,靶点是多个RTKs,IC50值是3980nmol/L。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! 号:1123837-84-2 别名:MGCD516;MG516 纯度:98.64% 分子量:629.68 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
巨大芽孢杆菌人2,3Dinor血栓烷B2Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白三烯C4(LTC4)
球孢白僵菌人11去氢血栓烷B2Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠色C(Cyt-C)
小煤炱菌属人血栓调节蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠色C(Cyt-C)
核果丛梗孢人纤溶抑制因子/凝血激活的纤溶抑制物Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠游离甲状腺(FT4)
双环林地蘑菇人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢaBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠游离甲状腺(FT4)
海洋拉布伦茨氏菌人血小板反应蛋白/凝血敏感蛋白1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血管紧张Ⅰ(Ang-Ⅰ)
雅致放射毛霉人血浆α颗粒膜蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血管紧张Ⅰ(Ang-Ⅰ)
松口蘑人末端补体复合物C5b-9Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠黑色抗体(MC Ab)
水栖黄杆菌人补体蛋白4Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠黑色抗体(MC Ab)
解污泥黄杆菌人补体蛋白3Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲状腺(T4)
地衣芽孢杆菌人ⅡBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲状腺(T4)
长枝木霉人类白抗原B27Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)
土曲霉人结合珠蛋白/触珠蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)
假单胞菌人血清总补体Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠过敏/补体片断4a(C4a)
加利福尼亚犁头霉人过敏/补体片断4Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠过敏/补体片断4a(C4a)
甲基营养型芽胞杆菌人补体片断5aBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠状腺原(T3)
锌指蛋白ZIC5抗体假单胞菌属欧洲鳗鲡肝脏细胞
锌指蛋白312抗体黄杆菌属小鼠脾脏成纤维样细胞
锌指蛋白57抗体吡咯伯克霍尔德氏菌幼兔肺成纤维样细胞
锌指蛋白300抗体假真菌样芽孢杆菌人皮肤毛细血管内皮细胞
小分子抑制剂(Sitravatinib)曲霉疏展变种 肉桂四环
短乳杆 植凋亡激活因子
阪崎肠杆 酵母浸出粉Fas相关死亡结构域蛋白
毁灭柱孢 漆黄Bcl-2相关X蛋白
大肠埃希 秦皮甲肿瘤坏死因子受体1
槐壳囊孢 花旗松谷盐
猴头 鬼臼心肌肌球蛋白重链
褐丝膜 四丁基高D-乳
蜡状芽孢杆 4,4'-联苯二脂多糖;内
巨大栓孔 三号胆盐一磷腺
康宁木霉 对羟基二磷腺
冷湖黄杆 梧桐胶氨酰tRNA合成
烟曲霉 2,2'-二硫二吡啶组氨酰tRNA合成
黑曲霉 4-(N-马来酰亚基)环己烷-1-羧琥珀酰亚酯组氨酰tRNA合成
茄链格孢 表儿茶粒巨噬集落激因子
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
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