幼蚊细胞；C6/36培养 返回列表页

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细胞名称  幼蚊细胞；C6/36培养
形态特性  上皮细胞样 　
生长特性  　贴壁生长
特征特性   C6/36细胞建系于1978年(Igarashi. A)，后经过多次克隆。细胞生长状态稳定，可成功用于多种病毒的增殖。
培养条件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS　
传代方法   1:3传代,2-3天传一代
传代情况  C123
冻存条件  基础培养基+5%DMSO+20%FBS　
支原体检测  　阴性
STR   STR 鉴定
同工酶

染色体

使用权限 A类
幼蚊细胞；C6/36培养操作流程：
1.1 主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线
幼蚊细胞；C6/36培养注意事项：
1. 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。
幼蚊细胞；C6/36培养美国菌种保藏中心， 又称美国模式菌种收集中心(ATCC)，是位于马里兰洲洛克菲勒的一家私营的，非赢利性组织。目前它可以提供各种动植物细胞、标准品、菌株达两万多种。ATCC成立于1925年，是世界上大的生物资源中心，由美国14家生化、医学类行业协会组成的理事会负责管理，是一家性、非盈利生物标准品资源中心。ATCC向发布其获取、鉴定、保存及开发的生物标准品，推动科学研究的验证、应用及进步 ATCC可以提供以下类别生物标准品：细胞株（3000多种）；菌株（15000多种）；动植物病毒株（2500多种）以及重组物质等。
孟加拉红培养基(虎红培养基)250g用于食品中霉菌及酵母菌总数测定

麦康凯肌醇阿东醇青霉素琼脂基础(MIAC) 100(g) incubation media 麦康凯肌醇阿东醇青霉素琼脂基础(MIAC) 100(g)

PDP琼脂 King Medium A 250克 绿脓菌色素测定

胰酪胨大豆羊血琼脂基础250用于蜡样芽孢杆菌的溶血测试验(SN标准)incubationmedia胰酪胨大豆羊血琼脂基础250用于蜡样芽孢杆菌的溶血测试验(SN标准)

T1N1Agar
PPLO琼脂250g用于支原体分离和培养的基础培养基

DTM培养基基础 250(g) incubation media DTM培养基基础 250(g)

胆盐乳糖培养基(BL) 250g 用于药品中大肠杆菌和绿脓杆菌的增菌培养。

醇脂玉米粉琼脂en80-CornAgarMedium用于白色念球菌培养

LactoseSulfiteMedium(LS)
APTAgar

氯三糖铁 NaCl Triple Sugar Iron Agar 用于副溶血性弧菌的生化反应筛选(SN标准)

无菌绵羊血清 Sterile Defidrinated Sheep Blood 100毫升 BR

GAM琼脂250g/瓶用于厌氧菌的培养，若需要，每培养基中可选择性添加004和incubationmediaGAM琼脂250g/瓶用于厌氧菌的培养，若需要，每培养基中可选择性添加004和1005

TTC乳糖琼脂 250g 依据ISO标准制作，用于滤膜法检测大肠菌群
CM-M044小鼠结肠平滑肌细胞*培养基100mL

DSC2 Others Rat 大鼠 DSC2 / Desmocollin-2 人细胞裂解液 (阳性对照)

角质细胞培养基KM-acf

HCE1细胞，细胞 小鼠红白血病细胞,MEL细胞 人脑血管外膜成纤维细胞HBVSMC

Hela S3(人细胞) 5×106cells/瓶×2

hMNC-PB single donor Pellet 人类外周血单核细胞团块单一捐献者，超纯 > 1 mio.cells 人羊膜上皮细胞总RNAHAmEpiC NA
CM-M042小鼠直肠平滑肌细胞*培养基100mL

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Pigeon/Shanghai/S1069/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)

间充质干细胞软骨细胞分化培养基MCDM

水牛皮肤成纤维样细胞;WB-S3 细胞，Hela细胞 HEL299(红白细胞白血病细胞)

EB病毒转化的人B淋巴细胞;KMY0910

MESDC2 Others Human 人 MESDC2 / MESD 人细胞裂解液 (阳性对照)
幼蚊细胞；C6/36培养PLA2G2E Others Mouse 小鼠 PLA2G2E 人细胞裂解液 (阳性对照)

人肺动脉平滑肌细胞总RNAHPASMC NA

U973 人白血病细胞

CL-0344HAN(人羊膜细胞)5×106cells/瓶×2

NSC，大鼠神经干细胞

人胚胎皮肤成纤维细胞;HES 人胎盘滋养层细胞*培养基 100mL