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H辅酶ⅡNADP检测试剂盒可见分光光度法

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所  在  地上海市

更新时间:2022-04-11 10:42:37浏览次数:213次

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货号 FS-01S63239
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检测方法

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H辅酶ⅡNADP检测试剂盒可见分光光度法

50管/24样

可见分光光度法

FS-01S63239

商品介绍:

测定意义

辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NADP+和NADPH含量测定可以计算NADP(NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值,其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一,而且在PPP途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。

测定原理

分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。NADPH通过PMS的递氢作用,使氧化型噻唑蓝(MTT)还原为甲瓒,570nm下检测吸光值,从而测定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原NADP+为NADPH,从而检测NADP+含量。

所需的仪器和用品

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

样本前处理步骤:
样本处理前须知

处理任何样本时,都必须注意:

(1) 实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头(2)实验前须检查各种实验器具是否干净,必要时对实验器具进 行清洁,避免污染干扰实验结果。

(a)组织样品处理方法:

1、 称取5±0.05g组织样品于50ml离心管中,先加入3ml已稀释好的样品提取液震荡2min;再加入10ml乙腈,充分震荡5min,

2、 加入2g中性氧化铝;震荡2min ,室温4000r/min以上,离心10min;;

3、 取6ml上清液于干净离心管中,加入5ml二氯甲烷震荡3min ,室温4000r/min以上,离心10min;;

4、 取下层清澈液体于玻璃管中,加入20ul氧化剂混匀,在56℃条件下氮气或空气流吹至*干燥;

5、 加入1ml复溶液,充分溶解干燥残留物。

6、 取100ul 上清液与100ul 已稀释好的复溶液充分混合30s,

7、 取50ul进行分析。

样本稀释倍数: 1倍

(b)水样品处理方法:

1、取50ul 上清液与450ul 已稀释好的复溶液充分混合30s,

2、取50ul进行分析。

样本稀释倍数:10倍

 

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实验通用规则:
1、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。

2、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。

3、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。

4、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

5、实验时,要使底物避光保存。

6、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加*。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

7、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。

8、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。

9、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支。吸取不同的液体后,要更换枪头。即使是吸取标准品时。

10、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。


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