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GBSS结合态淀粉合成酶检测试剂盒微量法

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所  在  地上海市

更新时间:2022-04-11 16:32:13浏览次数:127次

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货号 FS-01S63569
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产品名称:GBSS结合态淀粉合成酶检测试剂盒微量法
规格:100管/96样

检测方法:微量法

货号:FS-01S63569
商品介绍:

测定意义

GBSS(EC 2.4.1.21)以束缚态存在于淀粉体中,催化淀粉链的加长反应,主要负责直链淀粉的合成。

测定原理

GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP;进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比,通过340nm下测定NADPH的增加量,可以计算GBSS活性。

需自备的的仪器和用品

紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤:

实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。

粗酶液提取:

1、细胞或组织样品的制备:

培养细胞:先收集细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1ml提取液),超声波破碎细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。组织:按照组织质量(g):提取液体积(ml)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2、血清(浆)样品:直接检测。

试剂的组成和配制:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:液体 200μL×1 支,4℃保存;

试剂三:液体 4mL×1 瓶,4℃保存;

试剂四:粉剂×2 瓶,4℃保存。
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GBSS结合态淀粉合成酶检测试剂盒微量法 standard for GC,>99.5%(GC)PH标准缓冲溶液 pH=7.00±0.02 (25℃)DR3/TRAMP (death receptor-3)  DR3 死亡受体(抗原)

98%-氯化铵缓冲溶液 pH≈10E7 protein/HPV 16 (Human papillomavirus type 16)  人瘤病16型E7蛋白抗原

99%氢氧化钠标准溶液 1.000mol/L (1N)EGF-R (Epidemal growth factor receptor)  表皮生长因子受体(抗原)

三乙 AR,99.0%氢氧化钠标准溶液 0.5000mol/L (0.5N)Eukaryotic aspartyl protease(Rice)  天冬蛋白家族蛋白(水稻蛋白的一种)(抗原)

三乙 for HPLC, ≥99.5% (GC)氢氧化钠标准溶液 0.2000mol/L (0.2N)FAM3B/PANDER(PANcreatic DERived factor)  一种新型的胰岛因子(抗原)

三正 GR,99%氢氧化钠标准溶液 0.1000mol/L (0.1N)Fabp2 (fatty acid binding protein 2, intestinal)  脂肪结合蛋白2(抗原)

三正 CP,98.0%硫标准溶液 0.5000mol/L(1N)ECG2 (sophagus cancer-related gene-2)  食道癌相关基因(抗原)

三正丁 GCS, ≥99.5% (GC)硫标准溶液 0.2500mol/L(0.5N)Fibronectin (FN)  纤维连结蛋白(多肽抗原)

 


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