TRPV1激动剂(Capsaicin)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10361

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：TRPV1激动剂(Capsaicin)

英文名称：Capsaicin

产品规格：1mL(10mM)|50mg|100mg

货号：FS-X10361

产品介绍:

英文名称：Capsaicin

产品规格：1mL(10mM)|50mg|100mg

Capsaicin是一种TRPV1激动剂，作用HEK293细胞，EC50为0.29±0.05μM。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

号：404-86-4

别名：(E)-Capsaicin;8-Methyl-N-vanillyl-trans-6-nonenamide

纯度：98.39%

分子量：305.41

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

豇豆慢生根瘤菌高分子量神经丝蛋白抗体Human FBLN2(Fibulin-2) 人抗菌肽(Att)

柠条根瘤菌核因子/k基因结合核因子抗体Human FGG(Fibrinogen gamma chain) 人抗性磷5b(TRACP-5b)

枯草芽孢杆菌低分子量神经丝蛋白抗体Human VIP(VIP peptides) 人抗性磷(TRACP)

(蜡状芽胞杆菌)中分子量神经丝蛋白抗体Human TNFRSF10A(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10A) 人抗抗体(AsAb)

芽孢杆菌生长抑制蛋白NDN抗体Human FGG(Fibrinogen gamma chain) 人抗角蛋白丝聚集/丝集蛋白抗体(AFA)

链霉菌神经生长因子β抗体Human BCAM(Basal cell adhesion molecule) 人抗角蛋白抗体(AKA)

广食黄杆菌鼻咽癌相关基因6抗体Human VIP(VIP peptides) 人抗胶原蛋白抗体(CLA)

糖化酵母钠氢通道蛋白抗体Human CTGF(Connective tissue growth factor) 人抗甲状腺微粒体抗体(ATMA/TMAB)

青贮窖芽孢杆菌钠离子转运蛋白抗体Human βEP(Beta-endorphin) 人抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA/TGAB)

枯草芽孢杆菌神经元特异性烯化/γ 烯化抗体Human LRP2(Low-density lipoprotein receptor-related protein 2) 人抗甲状腺过氧化物抗体(TPO-Ab)

酿酒酵母神经营养因子-3前蛋白抗体Human BMPR1A(Bone morphogenetic protein receptor type-1A) 人抗肌内膜抗体IgA(EMA IgA)

枯草芽孢杆菌核受体相关因子-1抗体Human CD86(T-lymphocyte activation antigen CD86) 人抗肌联蛋白抗体(TTN)

酿酒酵母核因子2相关因子2抗体Human CXCR1(C-X-C chemokine receptor type 1) 人抗肌动蛋白抗体(AAA)

顶青霉神经纤毛蛋白1抗体Human C3(Complement C3) 人抗黄体生成抗体(Anti LH Ab)

扣囊复膜孢酵母神经生长因子4/5抗体Human LPA(Lipoprotein a) 人抗环胍肽抗体(CCP)

黑紫红菇巢蛋白NID2抗体Human CP(Ceruloplasmin) 人抗环瓜肽抗体(CCP)

桔绿木霉Trichoderma citrinoviride Bissett 质量规格：>98%,BR咖啡

平田头菇Agrocybe│pediades (Fr.) Fayod 质量规格：BR，>7U/MG, powder氧化

白马勃Calvatia│candida (Rostk.) Hollós 质量规格：活力≥30000u/g
TRPV1激动剂(Capsaicin)皱孢链霉 4-氨基苯频哪酯

普通变形杆邻氨基苯盐盐清道夫受体B类I型

哈茨木霉 2-基嘧啶-5-频哪酯球蛋白

紫红曲霉 9-蒽趋化因子配体5

环带拟盘多毛孢 2-蒽去甲肾上腺

桔青霉 3-氨基-4-固酮

嗜松青霉 4-氨苯基盐盐糖还原

薄花边伞2-1 4-乙酰氧基苯基频呐酯缺血修饰白蛋白

扩展青霉 3-氨基苯频呐酯热休克蛋白-70

镰刀仲丁基化镁绒毛膜促性腺β

串珠镰刀* 3-溴化镁溶

烟芽孢杆仲丁基锂溶血磷脂

酿酒酵母叔丁基锂肉碱

淡黄湿伞对甲肉碱脂酰转移

球孢枝孢对肉碱脂酰转移I
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)