转基因玉米品系Bt176核酸检测试剂盒 返回列表页

PCR的反应条件：
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。
如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。
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参数规格：
产品名称：转基因玉米品系Bt176核酸检测试剂盒
产品规格：48T   0.1PCR管
产品货号：FS-P10732
产品分类：荧光探针法
产品运输：低温运输
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
运输：低温、避光，快递免费送货上门。
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
实时荧光定量PCR：
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。因此，实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的：
1）Ct值的重现性PCR循环在到达Ct值所在的循环数时，刚刚进入真正的指数扩增期（对数期），此时微小误差尚未放大，因此Ct值的重现性，即同一模板不同时间扩增或同一时间不同管内扩增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值与起始模板的线性关系由于Ct值与起始模板的对数存在线性关系，可利用标准曲线对未知样品进行定量测定，因此，实时荧光定量PCR是一种采用外标准曲线定量的方法。
外标准曲线的定量方法相比内标法是一种准确的、值得信赖的科学方法。利用外标准曲线的实时荧光定量PCR是迄今为止定量最准确，重现性*定量方法，已得到的*，广泛用于基因表达研究、转基因研究，药物疗效考核、病原体检测等诸多领域。
植物乳杆菌植物亚种发酵奶等乳制品模式菌株: no自然发酵乳提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: CM0006生长条件: 37℃

植物内芽孢杆菌细菌模式菌株: no其他/岸边泥沙与水的混合物提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 821生长条件: 25℃

 -1515℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

枯草芽孢杆菌枯草亚种培养基: 0002α-淀粉酶,蛋白酶（固体发酵）提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 37℃ 液氮超低温冻结法;真空冷冻干燥法

大肠埃希菌培养基: CM0051模式菌株: no痰提供形式: 冻干物安全等级: 2生长条件: 36℃ -80℃冰箱冻结法

枯斑拟盘多毛孢培养基: 14模式菌株: no针叶提供形式: 斜面培养物安全等级: 1生长条件: 23-30 定期移植法

 F563产蛋白酶模式菌株: no种属: Actinomucor│repens提供形式: 冻干物安全等级: 1培养基: 0014生长条件: 25-28℃

草菇生长条件: 25℃培养基: 0014提供形式: 斜面培养物安全等级: 1模式菌株: no 液氮超低温冻结法；矿物油法；定期移植法

运动鲁杰氏菌培养基: 471近海细菌水样/上层海水提供形式: 斜面培养物模式菌株: no生长条件: 20-25℃ 液氮超低温冻结法；-80℃冰箱冻结法；真空冷冻干燥法

 -1516℃冰箱冻结；真空冷冻干燥

不动杆菌属培养基: CM0033模式菌株: no西沙诺尼成熟果内提供形式: 冻干物安全等级: 1生长条件: 28℃ -80℃冰箱冻结法

克鲁弗毕赤酵母共生微生物/鱼类共生菌模式菌株: no生物样/未知鱼3胃提供形式: 斜面培养物安全等级: 1培养基: 513生长条件: 28℃

青霉菌属菌种抗黑曲霉模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培养物安全等级: 1培养基: CM0014生长条件: 26C

酿酒酵母培养基: CM0077发酵制面包。提供形式: 冻干物安全等级: 1模式菌株: no生长条件: 28-30℃ 真空冷冻干燥法；定期移植法

假丝酵母(加词待译)深海酵母模式菌株: no水样/深层海水提供形式: 斜面培养物安全等级: 1培养基: 7生长条件: 28℃

青霉生长条件: 25-28℃培养基: 14根际土提供形式: 斜面培养物模式菌株: no 真空冷冻干燥法

刺五加苷EDMBT1 (Deleted in malignant brain tumor 1)  DMBT1抑癌基因抗原URG4  上调基因4抗体(N端)

竹节香附素A;银莲花素ADNA-PKcs peptide  DNA依赖蛋白激酶催化亚基多肽抗原UQCRFS1  质子梯度调节蛋白1抗体

常春藤皂苷BDPPA2 (developmental pluripotency associated gene2)  多能发育相关基因2抗原UQCRC2  线粒体辅酶色素C还原酶核心蛋白2抗体

柴胡皂苷ADR4/APO2/TRAILR1 (Death receptor 4)  死亡受体4抗原UQCRC1  辅酶色素C还原酶核心蛋白1抗体

柴胡皂苷CDR5/TNFRSF10B/CD262 (Death receptor 5)  肿瘤调亡素/死亡受体5抗原UPP1/Uridine Phosphorylase 1  尿嘧啶核苷磷化酶1抗体

柴胡皂苷DDP-I/DSP(desmoplakin I )  桥粒斑蛋白1抗原Unrip/STRAP  丝氨/苏氨激酶受体相关蛋白抗体

柴胡皂苷B1DVL1 (dishevelled 1)  蓬乱蛋白1UNC93B  内质网膜蛋白UNC93B抗体

柴胡皂苷B2Dynamin 2(Anti-Human Dynamin-2 )  鸟苷三磷酶－发动蛋白2抗体Unc18-3  突触囊泡融合蛋白Unc18-3抗体

土贝母苷甲Nadrin peptide  发育调节蛋白多肽抗原Ulex Europaeus Lectin 1/UEA1  荆豆凝集素1抗体

牛蒡子苷E2F1  转录因子E2F-1ULBP3/N2DL3  UL16结合蛋白3抗体
转基因玉米品系Bt176核酸检测试剂盒Flufenamicacid　氟芬那,氟灭　质量规格：>97.0%(GC)

Flufenamicacid　氟芬那,氟灭(标准品)　质量规格：>97.0%(GC)

Flumazenil　氟马西尼/氟马泽尼　质量规格：>97.0%(GC)

Flumazenil　氟马西尼/氟马泽尼(标准品)　质量规格：>97.0%(GC)

FluoxetineHydrochloride　盐氟西汀　质量规格：>97.0%(GC)

FluoxetineHydrochloride　盐氟西汀（标准品）　质量规格：>97.0%(GC)

Fluvoxaminemaleate　马来氟伏沙明　质量规格：>97.0%(GC)

Fluvoxaminemaleate　马来氟伏沙明（标准品）　质量规格：>97.0%(GC)

Formestane　福美斯坦　质量规格：>97.0%(GC)

Formestane　福美斯坦(标准品)　质量规格：>97.0%(GC)

Fosinoprilsodium　福辛普利钠　质量规格：>97.0%(GC)

Furosemide　呋塞米（速尿）　质量规格：>97.0%(GC)

Furosemide　呋塞米（标准品）　质量规格：>97.0%(GC)

Gemfibrozil　吉非罗齐　质量规格：>97.0%(GC)

Gemfibrozil　吉非罗齐（标准品）　质量规格：>97.0%(GC)(T)