ALK激酶抑制剂(CH5424802盐酸盐)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10693

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：ALK激酶抑制剂(CH5424802盐酸盐)

英文名称：CH5424802 Hydrochloride

产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

货号：FS-X10693

产品介绍:

CH5424802盐酸盐是ALK激酶高效抑制剂，IC50值为1.9nM，对ALK突变型L1196M也敏感。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

号：1256589-74-8

别名：Alectinib Hydrochloride;AF-802 Hydrochloride;RG-7853 Hydrochloride;RO-5424802 Hydrochloride

纯度：99.81%

分子量：519.08

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

间型腐霉磷化钙介质抗原Anti-CAPN11 AntibodySnurportin1蛋白(SNUPN1)

羊泰勒虫（张家川株-2）神经激肽A受体（多肽抗原）Anti-CAPN12 AntibodySnail同源物1(SNAI1)

大豆慢生根瘤菌钙蛋白（多肽）Anti-CARD10 AntibodySmoothened蛋白(SMO)

秦氏蜜环菌炎症负调控因子蛋白（抗原）Anti-CAPN9 AntibodySmoothelin蛋白(SMTN)

豌豆根瘤菌微管相关蛋白（抗原）Anti-CARD8 AntibodySmad同源物7(Smad7)

霍利斯格里蒙菌端粒（催化亚单位）（多肽抗原）Anti-CARD19 AntibodySmad同源物4(Smad4)

宇佐美曲霉转移生长因子–α（抗原）Anti-CARF AntibodySmad同源物3(Smad3)

掌状花耳钙/钙调依赖蛋白激2α抗原Anti-CARF AntibodySmad同源物1(Smad1)

微小杆菌钙/钙调蛋白依赖蛋白激IG抗原Anti-CARM1 AntibodySlit同源物3(Slit3)

委内瑞拉链霉菌转移生长因子–β1（抗原）Anti-P4 AntibodySlit同源物2(Slit2)

节杆菌属钙/钙调依赖蛋白激2b抗原Anti-P5 AntibodySlit同源物1(Slit1)

环状芽胞杆菌Park7/DJ-1/CAP1抗原Anti-P7 AntibodySlingshot同源物3(SSH3)

稻平脐孺孢环化相关蛋白CAP-2抗原Anti-Z1 AntibodySlingshot同源物2(SSH2)

生脂固氮螺菌转移生长因子–β2前体肽Anti-CAVIN3 AntibodySlingshot同源物1(SSH1)

枯草芽孢杆菌转移生长因子–β3（抗原）Anti-P9 AntibodySideroflexin5蛋白(SFXN5)

植物乳杆菌植物亚种转移生长因子β受体2（多肽抗原）Anti-CBFA2T3 AntibodySideroflexin4蛋白(SFXN4)

PGBD3蛋白抗体Phaeobacterinhibens人成神经细胞瘤（来自骨髓）

蛋白激Cα相互作用蛋白1抗体Fulvimarinapelagi大鼠肝癌细胞

丝/苏蛋白激5抗体Aurantimonascoralicida人视网膜内皮细胞

蛋白质磷1G抗体PP2CγPsychrobacillusinsolitus小鼠脑微血管内皮细胞
ALK激酶抑制剂(CH5424802盐酸盐)大肠杆 4--3-活化

真姬菇 3-苯碱性磷

紫色链霉吡咯-2-甲铜蓝蛋白

费希尔曲霉 2--4-甲基喹啉布病抗体

产气荚膜梭 A型 1,2,3-氧基苯雷帕霉靶蛋白

芸薹生链格孢 2--5-甲碳酐2

皱褶青霉甲基三辛基化(R=C8-C10)硫代反应物

耐多抗诺卡氏铋试剂II葡萄糖-6-磷脱氢

长孢洛德酵母 2,3-二苯甲线粒体肌激1A

卷枝毛霉卷枝变型四甲基脲碳酐2

安大略假丝酵母四基化甘油-3-磷酰基转移

泡盛曲霉甲脒盐盐γ球蛋白

阿尔通山碱线 (S)-2-(甲氧甲基)吡咯烷诱导型NO合

胶孢 (S)-(-)-2-(甲氧甲基)-1-吡咯烷甲环加氧2

食吡啶红球钠亚洲 I 型口蹄疫病
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)