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货号 | FS-X11014 |
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英文名称:IOX1
产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
货号:FS-X11014
产品介绍:
IOX1是2OG oxygenase高效广谱抑制剂,包括JmjC去甲基化酶家族,对KDM4A和KDM3A的IC50值分别为0.6uM和0.1uM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! 号:5852-78-8 纯度:97.04% 分子量:189.17 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
蜡状芽孢杆菌Pseudomonas fluorescens大鼠过氧化物体增殖因子活化受体γ( PPAR-γ)
黑曲霉Pseudomonas fluorescens大鼠环孢A(CsA)
杆状毛霉Pseudomonas fluorescens大鼠环孢A(CsA)
波氏假性阿利什霉Pseudomonas fluorescens大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)
三叶草根瘤菌Pseudomonas fluorescens大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)
洛斯里被毛孢Pseudomonas fluorescens大鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)
金福菇Pseudomonas fluorescens大鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)
壁芽孢杆菌Pseudomonas fluorescens大鼠抗内膜抗体(EMAb)
苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种Pseudomonas fluorescens大鼠抗内膜抗体(EMAb)
裂褶菌Pseudomonas fluorescens大鼠低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)
酿酒酵母Pseudomonas fluorescens大鼠低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)
草木樨中华根瘤菌Pseudomonas fluorescens大鼠15脂加氧(15-LO/LOX)
平菇(PL185)Pseudomonas fluorescens大鼠15脂加氧(15-LO/LOX)
大豆慢生根瘤菌Pseudomonas fluorescens大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)
沃氏富盐菌Pseudomonas fluorescens大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)
油菜假单胞菌Pseudomonas fluorescens大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)
早老蛋白-1抗体苜蓿茎点霉超氧化物歧化(SOD)分型测试盒(羟胺法)
突触后密度蛋白95抗体污黑腐皮壳总超氧化物歧化(T-SOD)比色法测试盒(羟胺法)
一种肿瘤抑制基因抗体N端禾谷镰孢菌还原(GR)比色法测试盒
甲状旁腺激相关蛋白抗体三隔镰刀菌总超氧化物歧化(SOD)比色法测试盒(WST-1 法)
2OG oxygenase抑制剂(IOX1)乳杆属 泰乐
平沙绿僵 复合蛋白保护剂HPD
丝轴黑粉* 复合蛋白保护剂DSP50
金产色链霉 复合蛋白保护剂DP7
大肠埃希氏 复合蛋白保护剂DP4
孢淡灰链霉 蛋白保护剂AEP-HBC
草青霉 (S)-2-苯基甘甲酯盐盐
腐皮镰孢 (L)-2-甲
浅紫灰链霉浅紫灰亚种 叔丁氧羰基-L-谷5叔丁脂
灰褐牛肝 BOC-L-谷5苄脂
害艾美耳球虫 Fmoc-S-三苯甲基-L-半胱
Lonsdalea quercina subsp. iberica BOC-S-Trityl-L-半胱
解淀粉周培瑾氏 芴甲氧羰基-L-天冬β-叔丁酯
犁形马勃 Boc-L-天冬4-环己酯
杰丁塞伯林德纳氏酵母 显轴买麻藤
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