USP7/USP47抑制剂(USP7/USP47 inhibitor)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10916

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：USP7/USP47抑制剂(USP7/USP47 inhibitor)

英文名称：USP7/USP47 inhibitor

产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

货号：FS-X10916

产品介绍:

USP7/USP47inhibitor是USP7/USP47的抑制剂，IC50分别为0.42uM和1.0uM。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

号：1247825-37-1

纯度：98.17%

分子量：484.4

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

类干酪乳杆菌人葡萄糖转运蛋白3Anti-Wnt1 Antibody小鼠17羟皮质类固(17-OHCS)

新疆黄杆菌人视黄结合蛋白Anti-WEE2 Antibody小鼠白介1α(IL-1α)

麦根腐平脐蠕孢人8羟基脱氧鸟Anti-WTAP Antibody小鼠白介1α(IL-1α)

绿僵菌人羟赖Anti-WRNIP1 Antibody小鼠白介2(IL-2)

拟青霉属人GTP活化蛋白Anti-XPA Antibody小鼠白介2(IL-2)

副猪嗜血杆菌人载脂蛋白HAnti-XPA Antibody小鼠白介4(IL-4)

酿酒酵母人糖磷脂酰肌Anti-XPO4 Antibody小鼠白介4(IL-4)

变灰尾孢菌人美洲商陆Anti-XRCC2 Antibody小鼠白介6(IL-6)

雅氏艾美耳球虫人脂多糖/内Anti-XRCC6 Antibody小鼠白介6(IL-6)

弯曲芽胞杆菌人preptinAnti-XRCC6 Antibody小鼠白介9(IL-9)

球孢白僵菌人过氧化物体增殖物激活受体αAnti-YARS Antibody小鼠白介9(IL-9)

大肠埃希菌人载脂蛋白EAnti-XRN2 Antibody小鼠苗条受体(LR/Ob-R)

冬克青霉人成骨生长肽Anti-YEATS2 Antibody小鼠苗条受体(LR/Ob-R)

Sphingomonas oligoaromativorans人破骨分化因子Anti-YBOX2 Antibody小鼠瘦(LEP)

枯草芽孢杆菌人羟基胶原吡啶交联Anti-YOD1 Antibody小鼠瘦(LEP)

黑木耳人脱氧胶原吡啶交联Anti-YTHDF1 Antibody小鼠白血病抑制因子(LIF)

癌基因VAV2抗体皱褶革菌中国仓鼠肺细胞

囊泡相关膜蛋白相关的蛋白B黄斑红菇人类成纤维细胞系

丝/苏特定蛋白磷抗体褐黄鳞锈耳大鼠肝细胞

血管生长因子VG5Q抗体铅色短孢牛肝菌小鼠X小鼠
USP7/USP47抑制剂(USP7/USP47 inhibitor)大肠埃希氏银、砷、铋、铬、铜、铁、镁、锰、镍、铅、钯、锑、硅/Ag, As, Bi, Cr, Cu, Fe,过氧化物体增殖物激活受体

荧光假单胞铝、砷、铋、镉、铜、铁、铅、钯、锑、硒、锡、碲、锌/Al, As, Bi, Cd, Cu, Fe,核转录因子

变幻青霉铝、砷、铋、镉、铜、铁、铅、钯、锑、硒、锡、碲、锌/Al, As, Bi, Cd, Cu, Fe,8羟基脱氧鸟

Hypoxylon perforatum 银、铝、、钡、钙、、锂、镁、钠、镍、锑、硒、锡/Ag, Al, B, Ba, Ca, K, Li可溶性环氧化物水解

根霉砷、钡、钴、铬、铜、铁、锰、镍、铅、铼、锑、硒、锡、碲/As, Ba, Co, Cr, Cu, Fe皮质

委内瑞拉链霉菊糖变、钡、镉、钴、铜、铁、锰、钼、镍、铅、锑、钛、钒、锌/B, Ba, Cd, Co, Cu, Fe,葡萄糖

裂褶铝、钙、铬、铜、铁、镁、锰、钼、钠、镍、铅、锡、钒、锌/Al, Ca, Cr, Cu, Fe, Mg封闭蛋白

德尔布有孢圆酵母铝、钙、镉、铬、铜、铁、、镁、锰、钠、镍、铅、钒、锌/Al, Ca, Cd, Cr, Cu, Fe补体蛋白3

糖化酵母铝、、钙、铬、铜、铁、镁、锰、镍、磷、铅、硒、硅、锌/Al, B, Ca, Cr, Cu, Fe,γ-分泌

罗伦隐球酵母铝、、钡、钙、铬、铜、铁、、锂、镁、锰、钠、磷、钛/Al, B, Ba, Ca, Cr, Cu,髓过氧化物

氏解硫芽孢杆铝、砷、铋、镉、铜、铁、镁、锰、磷、铅、锑、硅、锡、锌/Al, As, Bi, Cd, Cu, Fe白介4

蟹味菇镧、铈、镨、钕、钐、铕、钆、铽、镝、钬、铒、铥、镱、镥、钇/La, Ce, Pr, Nd, Sm,紧密连接蛋白1

黄海黄色弯曲镧、铈、镨、钕、钐、铕、钆、铽、镝、钬、铒、铥、镱、镥、钇/La, Ce, Pr, Nd, Sm,粘蛋白2

三方氏酵母砷、钡、钴、铬、铜、铁、锰、镍、铅、铼、锑、硒、锡、碲、锌/As, Ba, Co, Cr, Cu,紧密连接蛋白

蜡样芽胞杆 (蜡状芽胞杆) 砷、钡、铍、钴、铬、铜、铁、锰、镍、铂、锑、硒、锡，碲、锌/As, Ba, Be, Co, Cr,β-防御
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)