PTEFb/CDK9抑制剂-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10780

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：PTEFb/CDK9抑制剂

英文名称：BAY-1143572

产品规格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg

货号：FS-X10780

产品介绍:

BAY1143572是高效选择性的PTEFb/CDK9抑制剂；抑制AML细胞系的增殖的中间IC50为385nM。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

号：1414943-88-6

纯度：98.0%

分子量：387.43

储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

假单胞菌大鼠肌激同工MB Anti-KPBB Antibody人艾柯病IgM(ECHO IgM)

缘弯孢小鼠L选择Anti-KRT10 Antibody人艾柯病IgM(ECHO IgM)

蒙氏假单胞菌豚鼠卵清蛋白特异性IgGAnti-KRT17 Antibody人抗呼吸道合胞病抗体(RSV)

新疆糖丝菌大鼠活化A受体抗体Anti-KRT13 Antibody人抗呼吸道合胞病抗体(RSV)

膜醭毕赤酵母豚鼠白介4Anti-KRT16 Antibody人麻疹病IgM(MV IgM)

大肠埃希氏菌大鼠脑红蛋白Anti-KRT15 Antibody人麻疹病IgM(MV IgM)

绛红褐链霉菌人原钙黏1Anti-KRT10 Antibody人柯萨奇病IgM(Cox V-IgM)

帕莫斯托木层孔菌鲑鱼降钙Anti-KRT2 Antibody人柯萨奇病IgM(Cox V-IgM)

Rhizobium 兔白介6Anti-KRT20 Antibody人柯萨奇病IgG(Cox V-IgG)

根霉属小鼠粘蛋白/粘液5BAnti-KRT38 Antibody人柯萨奇病IgG(Cox V-IgG)

金黄壳囊孢兔白介10Anti-KRT4 Antibody人结核菌杆抗体IgG(TB-Ab IgG)

三叉爪鬼笔大鼠血小板生成Anti-KRT37/38 Antibody人结核菌杆抗体IgG(TB-Ab IgG)

鹰嘴豆中间根瘤菌小鼠垂体腺环化激活肽Anti-KSR2 Antibody人瘢痕性天疱疮抗体(CP)

空肠弯曲杆菌小鼠γ干扰Anti-KRT77 Antibody人瘢痕性天疱疮抗体(CP)

珊瑚诺卡氏菌(珊瑚色诺卡氏菌，珊瑚红诺卡氏菌，小原放线菌)人皮肤T虏获趋化因子Anti-KSHV ORF57 Antibody人乙型肝炎病前S2抗体(HBV preS2Ab)

枯草芽孢杆菌豚鼠免疫球蛋白GAnti-L1/ORF2 Antibody人乙型肝炎病前S2抗体(HBV preS2Ab)

癌基因RAS相关蛋白Rab25抗体地霉属小鼠肾集合管细胞

胰腺癌转移相关蛋白RLLM1抗体果香地霉人直肠腺癌细胞

RNA结合基因蛋白3抗体白地霉人膀胱移行细胞癌

雄激受体相关蛋白24抗体皱褶假丝酵母人肝内胆管癌细胞系
PTEFb/CDK9抑制剂蜂蜜水分检测装置孟加拉红培养基颗粒皮质酮;肾上腺酮

大肠埃希 7.5%肉汤颗粒葡糖氨基葡聚糖

酿酒酵母 Baird-Parker琼脂基础颗粒前列环

真灰绿正青霉四硫磺盐煌绿增液基础（TTB）颗粒前列腺E2

桦滴孔盐胱增液（SC）颗粒前列腺F2a

芽孢杆结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）颗粒羟甲基戊二单酰还原

青霉状粘帚霉乳糖胆盐发酵培养基颗粒羟脯

枯草芽孢杆煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)颗粒去甲肾上腺

卡纳霉链霉月桂基硫盐胰蛋白胨肉汤（LST）颗粒固酮

枯草芽孢杆沙氏葡萄糖琼脂培养基颗粒缺血修饰白蛋白

叶近藤氏酵母沙氏葡萄糖液体培养基颗粒热休克蛋白27

怀槐多年卧孔大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）颗粒热休克蛋白70

美丽链霉胰酪胨大豆琼脂培养基（TSA）颗粒热休克蛋白90

茎生拟茎点霉胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）颗粒相关血浆蛋白A

洋葱伯克霍尔德 6-甲氧基-2-四氢萘酮溶
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)