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货号 | FS-X9722 |
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培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称:细胞活性检测试剂盒-绿色荧光
英文名称:
产品规格:500T|1000T
货号:FS-X9722
产品介绍:
绿色荧光细胞活性检测试剂盒是采用C01细胞活性探针检测细胞活性的试剂盒。C01细胞活性探针是一种可以对活细胞进行荧光标记的细胞活性染色试剂,当C01荧光探针其进入到细胞质后,酯酶会将其水解并留在细胞内,发出强绿色荧光,荧光强度与活细胞数量成正比。 C01细胞活性探针是一种性合成的绿色荧光探针,其本身荧光极低,进入活性细胞并被活细胞的酯酶剪切生成强绿色荧光的产物。绿色荧光产物的的激发和发射波长分别为488nm和520nm。C01细胞活性探针的细胞毒性很低,不会抑制任何的细胞功能如增殖。使用C01细胞活性探针的活性检测的实验结果与标准的51Cr-释放法所得结果相一致。 储存条件:C01探针-20℃防潮避光保存; 探针稀释液2-8℃保存。 探针稀释液长期不用可以-20℃保存。 有效期:一年。 |
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
成纤维细胞生长因子4(FGF4)英文名:FGF4 艾滋病病制约锚定蛋白抗体包装5g
成纤维细胞生长因子13(FGF-13)英文名:FGF-13 腺苷环化1抗体包装1g
成纤维细胞生长因子10(FGF10)英文名:FGF10 核糖核L抑制蛋白抗体包装5g
超氧化物歧化(SOD)英文名:SOD Rho GTP激活蛋白24抗体包装25g
超敏C反应蛋白(hs-CRP)英文名:hs-CRP GTP激活蛋白ASAP3抗体包装5g
肠脂肪结合蛋白(iFABP)英文名:iFABP 激活受体1C抗体包装25g
叉头框蛋白03(FoxP3)英文名:FoxP3 整合样金属蛋白与凝血13型抗体包装1g
层连蛋白/板层(LN)英文名:LN 去整合样金属蛋白11抗体包装25g
草胺膦乙酰转移(PAT)英文名:PAT 去整合样金属蛋白12抗体包装5g
不对称二基精(ADMA)英文名:ADMA 去整合样金属蛋白15抗体包装1g
补体因子H(CFH)英文名:CFH 去整合样金属蛋白2抗体包装25g
补体片断5a(C5a)英文名:C5a 载脂蛋白E2受体抗体包装5g
补体片断3a(C3a)英文名:C3a 腺苷A1受体抗体包装100g
补体蛋白5(C5)英文名:C5 通道蛋白0抗体包装1g
补体蛋白4(C4)英文名:C4 转录因子AP-2γ抗体包装25g
淀粉样肽前体蛋白抗体结缔组织生长因子(CTGF)Isoindigotin is used in the therapy of Y.
细胞活性检测试剂盒-绿色荧光棒杆 5-溴-3-氟-2(1H)-吡啶酮甲胎蛋白异质体3
红缘层孔 2,5-二溴-3-氟吡啶甲肟前列腺D2
异配囊接霉 3-溴-2-氟甲状旁腺
达里湖芽孢杆 4-苄氧基-3,5-二氟苯酸甲状腺抗体;甲状腺激球蛋白
蒂盖姆头珠霉 乙酰酮铈水合物甲状腺激阻断抗体
相思根瘤 2,3-二氟-4-丁氧基苯酸甲状腺过氧化物
那波链霉 5-溴-7-甲基-1H-吲唑甲状腺结合球蛋白
氨酸棒杆 呋喃酚甲状腺钠转运体
平菇 6-羧基六荧光甲状腺球蛋白
罗尔细薄 6-羧基四荧光甲状腺受体相互作用蛋白6
根腐平脐蠕孢 4-(三氟甲基)盐酸盐甲状腺
布氏乳杆 2,6-二氟吡啶-3-甲间变性瘤激
psilent-dual1(pSD1) 5,10-二氢-5,10-二甲基吩间皮
哈氏弧 三聚聚磷酸盐碱性成纤维生长因子
铜绿假单胞(绿脓杆)* 对异丁碱性成纤维生长因子9
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
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