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PFKFB3抑制剂(PFK-158)

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所  在  地上海市

更新时间:2022-05-23 16:27:52浏览次数:155次

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货号 FS-X10991
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中文名称:PFKFB3抑制剂(PFK-158)

英文名称:PFK-158

产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

货号:FS-X10991

产品介绍:

PFK-158是一种有效的选择性PFKFB3抑制剂,目前对晚期实体瘤研究处于临床一期阶段。

注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途!

号:1462249-75-7

纯度:98.11%

分子量:328.29

储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

培养操作步骤:

1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。

8、结果分析

a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

葡枝根霉Escherichia coli大鼠视黄结合蛋白(RBP)

棒状双歧杆菌Escherichia coli大鼠促性腺激释放激受体抗体(GNRHR-Ab)

枝状枝孢菌Escherichia coli大鼠促性腺激释放激受体抗体(GNRHR-Ab)

芽孢杆菌Escherichia coli大鼠血管性血友病因子裂解蛋白(ADAMTS13/vWF-cp)

枯草芽孢杆菌Escherichia coli大鼠血管性血友病因子裂解蛋白(ADAMTS13/vWF-cp)

变异棒杆菌Escherichia coli大鼠主要碱性蛋白(MBP)

木霉属Escherichia coli大鼠主要碱性蛋白(MBP)

万寿菊黄色杆菌Escherichia coli大鼠嗜性粒阳离子蛋白(ECP)

局限青霉Escherichia coli大鼠嗜性粒阳离子蛋白(ECP)

盘长孢状盘孢Escherichia coli大鼠钙调磷(CaN)

蘑菇Escherichia coli大鼠钙调磷(CaN)

皱褶青霉Escherichia coli大鼠抑制结合蛋白(INHBP)

褐平脐蠕孢Escherichia coli大鼠抑制结合蛋白(INHBP)

嗜几丁质芽孢杆菌Escherichia coli大鼠抗甲状腺过氧化物抗体(TPO-Ab)

鲁地链霉菌Escherichia coli大鼠抗甲状腺过氧化物抗体(TPO-Ab)

黄绿木霉Escherichia coli大鼠凋亡诱导因子(AIF)

蛋白体复合物C5抗体小孔异担子菌花鼠皮肤成纤维样细胞

磷脂A2激活蛋白抗体光核纤孔菌花鼠肾上皮样细胞

胸磷化抗体齿白木层孔菌银星竹鼠皮肤成纤维样细胞

早老蛋白-2抗体拟缘小孔菌姬鼠皮肤细胞
PFKFB3抑制剂(PFK-158)斡氏假单胞 β-D-乳糖

枯草芽孢杆 愈创木

苏云金芽孢杆 喇叭茶

布氏柠檬杆 雌二

酿酒酵母 马尾柴

藤仓镰孢 香草甲酯糖

粉状毕赤酵母 4-(N-马来酰亚甲基)环己烷-1-羧磺基琥珀酰亚酯钠盐

酿酒酵母 仙茅木

芒果囊孢属 5,6,3',4'-四羟基-7-甲氧基黄酮

鲑色野野村氏 新橙皮二氢查尔酮

假单胞 脱氢山楂

猴假单胞 -羟基-6-铁屎酮

粟褐芽孢杆 硝铽

黑曲霉 曼陀罗萜酮

矩圆黑盘孢 活性红 K-7B

 


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