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货号 | FS-X11047 |
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培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称:B-Raf抑制剂(HG6-64-1)
英文名称:HG6-64-1
产品规格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
货号:FS-X11047
产品介绍:
HG6-64-1是有效选择性的B-Raf抑制剂,来自WO2011090738A2,化合物实例9(XI-1)。在B-raf V600E转化的Ba/F3细胞中IC50值为0.09μM。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! 号:1315329-43-1 别名:HG-6-64-01;HG-6-64-1;HG 6-64-1 纯度:99.05% 分子量:577.64 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
嗜细小链孢菌Bacillus thuringiensis大鼠L解(PAL)
灭癌链霉菌Bacillus thuringiensis大鼠可溶性CD30配体(sCD30L)
沉积物冷弯曲菌Bacillus thuringiensis大鼠可溶性CD30配体(sCD30L)
绿梭链孢Bacillus thuringiensis大鼠可溶性CD40配体(sCD40L)
麦根腐平脐蠕孢Bacillus thuringiensis大鼠可溶性CD40配体(sCD40L)
宇佐美曲霉Bacillus thuringiensis大鼠干因子受体(SCFR)
淡天蓝链霉菌Bacillus thuringiensis大鼠干因子受体(SCFR)
黄空柄牛肝菌Bacillus thuringiensis大鼠基质衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)
猴头菇Bacillus thuringiensis大鼠基质衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)
微小链霉菌Bacillus thuringiensis大鼠血管生成受体Tie1(ANG-R-Tie1)
毛地黄壳针孢*Bacillus thuringiensis大鼠血管生成受体Tie1(ANG-R-Tie1)
香菇Bacillus thuringiensis大鼠含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪激2(Tie-2)
土星拟威尔酵母subsufficiens变种Bacillus thuringiensis大鼠含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪激2(Tie-2)
枯草芽孢杆菌枯草亚种Bacillus thuringiensis大鼠基质金属蛋白抑制因子2(TIMP-2)
大肠埃希氏菌Bacillus thuringiensis大鼠基质金属蛋白抑制因子2(TIMP-2)
肉梭菌 C型Bacillus thuringiensis大鼠基质金属蛋白抑制因子3(TIMP-3)
肿瘤血管内皮调节蛋白Robo4抗体黄褐假单胞菌列克星敦沙门氏菌
络丝蛋白抗体呼吸系统贪铜菌密尔沃基沙门氏菌
视网膜母细胞瘤相关蛋白p130抗体产黄假单胞菌卢特格尔沙门氏菌
血栓调节蛋白抗体赛维瓦尔假单胞菌格里沙特沙门氏菌
B-Raf抑制剂(HG6-64-1)杀黄胞链霉 新乌头原碱
长枝木霉 乌头原碱
梭 苯甲酰次乌头原碱
间型脉孢 苯甲酰新乌头原碱
杀鲑气单胞 苯甲酰乌头原碱
新疆假诺卡氏 滇
猪链球分型血清参考品 血清型 SS8 印
植物乳杆植物亚种 次
块 新
大肠埃希氏 KFY
泡盛曲霉 去甲斑蝥
Marivirga sp. 硬脂
草青霉 栀子
异常汉逊酵母 5-腺三磷二钠盐
金黄色葡萄球金黄亚种 5-腺二磷二钠盐
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
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