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货号 | FS-X10983 |
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培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称:脂肪酸合成酶FASN有效抑制剂(C75 trans)
英文名称:C75 trans
产品规格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
货号:FS-X10983
产品介绍:
C75trans是C75的trans形式,C75是脂肪酸合成酶FASN有效抑制剂。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! 号:191282-48-1 别名:C 75 trC-75 trans-racemic;trans-C75 纯度:99.86% 分子量:254.32 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
多黏类芽孢杆菌Escherichia coli大鼠血小板生成(TPO)
康宁木霉Escherichia coli大鼠可溶性凋亡相关因子(sFAS/Apo-1)
Paenibacillus agarexedensEscherichia coli大鼠可溶性凋亡相关因子(sFAS/Apo-1)
产气荚膜梭菌 C型Escherichia coli大鼠Bcl-2相关X蛋白(BAX)
桔青霉Escherichia coli大鼠Bcl-2相关X蛋白(BAX)
菌种中心 生活饮用水总大肠菌群质控样品(多管发酵法)Escherichia coli大鼠甘露糖结合蛋白/甘露糖结合凝集(MBP/MBL)
樟疫霉Escherichia coli大鼠甘露糖结合蛋白/甘露糖结合凝集(MBP/MBL)
苏云金芽孢杆菌Escherichia coli大鼠白介7(IL-7)
雅致放射毛霉Escherichia coli大鼠白介7(IL-7)
裂褶菌Escherichia coli大鼠丝/苏蛋白磷(STK)
鲁考弗美奇酵母Escherichia coli大鼠丝/苏蛋白磷(STK)
类诺卡氏菌Escherichia coli大鼠抗红抗体(RBC)
动球菌Escherichia coli大鼠抗红抗体(RBC)
巴斯德毕赤酵母Escherichia coli大鼠CD3分子(CD3)
孢小克银汉霉轮生变种Escherichia coli大鼠CD3分子(CD3)
苏云金芽孢杆菌云南亚种Escherichia coli大鼠c-Jun基末端激(JNK)
富含亮重复结构域蛋白2抗体杂色尾孢草鱼肾细胞
孤儿核受体TAK1抗体贝伦格葡萄座腔菌大鼠脊髓背角神经细胞
核仁磷蛋白抗体北方蜜环菌人肾皮质曲小管上皮细胞
嗜中性粒细胞胞浆因子4抗体粉红聚端孢霉PG13 逆转录病毒包被的TK-NIH3T3细胞
脂肪酸合成酶FASN有效抑制剂(C75 trans)猴头 -3-烯甲酯氢-ATP
皱褶假丝酵母 紫树甙氢-ATP
卷缘齿白变种 灵芝DM钙-ATP
黑曲霉 异内酯钠-钙交换蛋白
真姬菇 9-甲氧基离子;碳氢根离子交换蛋白
棒状乳杆扭曲亚种 4-羟基异亮抗肽
大肠杆 木蝴蝶A黄体生成
链霉 (24Z)-3,4-开环甘遂-4(28),7,24-三烯-3,26-二
大肠杆 Thunberginol C
嗜线虫致病杆 脱氢芳樟
耐久肠球 莲心碱高盐
黑木耳 原花青C1
根瘤 原花青B3
中慢生华癸根瘤 丹参
暗孢节菱孢 知母皂B
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
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