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当前位置：上海抚生实业有限公司>>细胞生物学试剂>>抑制剂激活剂>> ERBB家族抑制剂(Dacomitinib)
| 货号 | FS-X10568 |
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产品介绍:
Dacomitinib是一种特异性的不可逆抑制剂ERBB家族抑制剂，作用于EGFR，ERBB2和ERBB4，IC50分别为6nM，45.7nM和73.7nM。 注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！ 号：1110813-31-4 别名：PF-00299804;PF-299804 纯度：99.91% 分子量：469.94 储存条件：-20℃，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
英文名称：Dacomitinib
产品规格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
货号：FS-X10568
实验报告：
一、分离与培养： 1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小； 2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置； 3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化； 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养； 5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养； | 二、免疫荧光鉴定： 1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min； 2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min； 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜； 5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h； 6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤：
1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
棕黑腐质霉花生四烯15脂氧合2抗体Anti-NOGOR(RTN4R) Antibody脑膜瘤基因1(MN1)
毛腿环锈伞硫氧还蛋白还原抗体Anti-Nogo A/RTN4 Antibody脑富含膜附着信号蛋白1(BASP1)
球孢白僵菌5-羟色受体2C抗体Anti-NOL3 Antibody脑啡肽2(NEP2)
蕈状芽孢杆菌5-羟色受体5B抗体Anti-NONO Antibody脑啡肽(NEP)
黑曲霉丝/精相关核基质蛋白4抗体Anti-NOS1 Antibody脑多巴神经营养因子(CDNF)
维及尼链霉菌丝/精相关核基质蛋白3抗体Anti-NOS1 Antibody脑蛋白44样蛋白(BRP44L)
曲霉磷化丝/苏蛋白激II β(casein kinase IIβ)抗体Anti-non-muscle Myosin IIB/MYH10 Antibody脑蛋白44(BRP44)
四川散斑壳单核蛋白5抗体Anti-NOS2 Antibody囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)
健康皮张抗原SAMD9蛋白抗体Anti-NOS2 Antibody囊泡乙酰转运蛋白(VAChT)
尖孢镰刀菌SARM1蛋白抗体Anti-NOS3 Antibody囊泡单转运蛋白2(VMAT2)
间型弯孢染色质组装因子1P155抗体Anti-NOTCH1 Antibody耐氧化性能蛋白1(OXR1)
链格孢蛙皮降压肽抗体Anti-NOTCH2 Antibody耐扭蛋白3A(TOR3A)
哈茨木霉信号诱导增殖相关蛋白1样蛋白2抗体Anti-NOTCH1 Antibody耐扭蛋白2A(TOR2A)
滑菇、光帽黄伞DNA聚合δ相互作用蛋白3抗体Anti-NOTCH4 Antibody耐扭蛋白1B(TOR1B)
橙色绿屈扰菌丝/苏蛋白激SRPK2抗体Anti-NOVA1 Antibody耐扭蛋白1A(TOR1A)
猴头分化蛋白SEPT8抗体Anti-NOVA2 Antibody钠协同转运蛋白(NCCT)
视神经相关蛋白1抗体简单芽孢杆菌人主动脉内皮细胞提取物
螺旋转录因子OTP抗体玫瑰色孙修琴菌人脐动脉内皮细胞提取物
少突胶质细胞转录因子3抗体绿针假单胞菌橙色亚种人大隐静脉内皮细胞提取物
嗅觉受体家族5亚基1抗体嗜盐螺旋杆菌人主动脉平滑肌细胞提取物
ERBB家族抑制剂(Dacomitinib)三叶草根瘤 3-氟-4-甲氧基苯铁蛋白
Acinetobacter soli 双(六氟乙基酮)合镍(II)，水合磷肌激
少根根霉原变种 甲次硫钠 水合物病性关节炎抗体
异常汉逊酵母 3-磺基十四烷基二甲基网状内皮增生症病抗体
野牡丹尼尔氏酵母 亚钙水合物可溶性Toll样受体4
球孢白僵 盐苄丝肼整合β1
大肠杆 化钬(III)六水合物纤调蛋白
芽孢杆 反式二氨基二化铂(II), Pt minE钙粘着蛋白;上皮性钙黏附蛋白
黑曲霉 磷镧(III) 水合物 (REO)拓扑异构2
佛雷德里克斯堡假单胞 2-羧基苯钙结合蛋白
酿酒酵母 3，5-二甲基-4- 硝基吡啶-2-甲β-骨胶原交联
芹侧耳（杏鲍菇） 乙二四乙铁钠盐纤维蛋白
枯草芽孢杆 三氟磺铽(III)水合物纤连蛋白
大肠埃希氏 Fmoc--4-甲不饱和脂肪
薄花边伞 盐伊伐布雷定神经肽Y
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