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激酶2(Chk2)抑制剂(BML-277)

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所  在  地上海市

更新时间:2022-05-23 16:17:43浏览次数:207次

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货号 FS-X10963
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中文名称:激酶2(Chk2)抑制剂(BML-277)

英文名称:BML-277

产品规格:1mL(10mM)|10mg|50mg

货号:FS-X10963

产品介绍:

BML-277是一种选择性的检测点激酶2(Chk2)抑制剂,IC50为15nM。

注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途!

号:516480-79-8

别名:Chk2 Inhibitor II;C 3742

纯度:97.14%

分子量:363.8

储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

培养操作步骤:

1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。

8、结果分析

a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

枯草芽孢杆菌人甲状腺结合球蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工MM(GP-MM)

球毛壳菌人晚期糖基化终末产物Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工BB(GP-BB)

巨兽芽孢杆菌人C多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖原磷化同工BB(GP-BB)

点柄粘盖牛肝菌人晚期糖基化终末产物受体Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲状腺抗体(TAb)

毕赤酵母人胰高血糖Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠甲状腺抗体(TAb)

弗雷德里克斯堡假单胞菌人胰多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗促甲状腺受体抗体(TRAb)

大肠埃希菌人胰岛自身抗体Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗促甲状腺受体抗体(TRAb)

壳蕉孢菌人谷脱羧Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠儿茶(CA)

杂色尾孢人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠儿茶(CA)

类动胶杜擀氏菌属人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介27(IL-27)

休哈塔假丝酵母休哈塔亚种人未磷化类胰岛生长因子结合蛋白-1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介27(IL-27)

大豆慢生根瘤菌人甲状旁腺激样蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介23(IL-23)

解杆菌人内脂/内脏脂肪Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠白介23(IL-23)

柑橘炭疽盘孢菌人apelin 12Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠心肌营养1(CT-1)

大肠埃希菌人葡萄糖依赖性胰岛释放多肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠心肌营养1(CT-1)

喜盐芽孢杆菌人胰岛原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)

尾部结构蛋白抗体万寿菊链格孢家兔皮肤细胞

8-羟基鸟DNA糖基化向日葵链格孢大额牛肺细胞

µ-型阿片受体抗体丝轴黑粉菌树鼩肾上皮样细胞

胚胎干细胞关键蛋白2抗体角鳞灰鹅膏菌小菊头蝠肺成纤维样细胞
激酶2(Chk2)抑制剂(BML-277)耐寒短杆 毛栲利△1-吡咯啉-5-羧合成

香菇 3,4-二羟基肉桂乙酯谷氨酰合成

黄杆 DL-甲状腺肿谷脱氢

酿酒酵母 二氢7-羟基-3-(4-羟苯基)-4-苯并吡喃酮琥珀-Q还原

大豆慢生根瘤 色C氧化还原

Botryosphaeria parva  盐帕洛诺琼色C还原

酿酒酵母 7-羟基黄酮琥珀-Q还原

栖植物潘隆尼亚碱湖杆 S-(5'-腺基)-L-化蛋色C氧化还原

法布里德巴利酵母 8-姜色C还原

产氨棒杆 紫草NADH脱氢

根瘤 β-桉叶ATP合成

粘着剑* 3,4,5-氧基苯乙烯游离睾酮

球孢白僵 羊毛甾游离雌二

核盘 木兰花碱(化物)α2巨球蛋白

平脐蠕孢 甲磺雷沙吉兰造血器官坏死病抗体

 


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