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货号 | FS-X10968 |
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中文名称:MEK抑制剂(Refametinib)
英文名称:Refametinib
产品规格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
货号:FS-X10968
产品介绍:
Refametinib(RDEA119,BAY86-9766)是MEK抑制剂,对MEK1和MEK2的IC50分别为19nM和47nM,有抗肿瘤活性。 注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途! 号:923032-37-5 别名:BAY 869766;BAY 86-97661;RDEA119 纯度:98.46% 分子量:572.34 储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。 |
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
美丽盐单胞菌人钙网蛋白Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠催乳(PRL)
帚状曲霉人网膜Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠抵抗(Resistin)
矿泉水 大肠菌群人基质γ羧基谷蛋白Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠抵抗(Resistin)
丝球霉属人基质裂解蛋白/基质溶Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠乙酰受体抗体(AChRab)
局限青霉人螺旋肽Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠乙酰受体抗体(AChRab)
首尔红色杆菌人溶体相关膜蛋白2Bacillus thuringiensis subsp. israelensis小鼠骨钙/骨谷蛋白(OT/BGP)
支气管败血波氏菌人软骨糖蛋白39Bacillus thuringiensis subsp. galleriae小鼠骨钙/骨谷蛋白(OT/BGP)
节杆菌人不透光相关蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠γ基丁(GABA)
大肠埃希菌人鞭毛蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠γ基丁(GABA)
柱状假丝酵母人多聚血清蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠5羟色(5-HT)
根霉人胞浆免疫球蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠5羟色(5-HT)
大豆慢生根瘤菌人纤维介蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kenyae小鼠P物质受体(SP-R)
嗜嗜热双歧杆菌猪亚种人泛蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠P物质受体(SP-R)
草螺菌人类粘蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠P物质(SP)
酿酒酵母人弹性蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠P物质(SP)
孟氏假单胞菌人套膜蛋白Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠血管活性肠肽(VIP)
离子通道蛋白27抗体桂花耳COC1细胞耐药亚株
跨膜受体蛋白Notch-2抗体冷杉囊孔菌昆虫卵巢细胞
生殖细胞增殖相关蛋白NANOS2抗体小鳞毛锈伞猫星形脑胶质细胞
亲核β1抗体粉色小菇牛陀螺状细胞
MEK抑制剂(Refametinib)烟曲霉 Tanshinlactone过氧化物体增殖物激活受体α2
球孢白僵 Noreugenin甘油二酯O-酰基转移
根瘤 Pinostilbenoside周期Ⅰ
异常威克汉姆酵母 ConfluentinAurora激A
根霉属 Norcepharadione B分裂周期因子20
果生链核盘 Carpachromene周期B1
酿酒酵母 Penduletin分裂周期因子2
鸡腿菇 SteppogeninMyc原癌基因蛋白
相思根瘤 Hinokiol内啡肽
糙皮侧耳 Canadine诺达病
粪肠球 Friedelanol纤维
费氏中华根瘤(未复核) Oleuropeic acid补体1q
大秃马勃 Lecanoric acid精蛋白1
酿酒酵母 Dihydrophaseic acid核因子κB
假单孢 Lacinilene C三磷腺柠檬裂解
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