液相色谱仪堵塞和漏液的诊断与预防

液相色谱仪是属于易学难用的仪器，特别讲究“正确使用"和经验。液相工作者接触最多的是流动相，也就是流动相，是造成液相色谱各种问题的最主要源头。
液相色谱仪见的故障一是堵，二是漏。下面就这两点分别展开讨论。（注：流动相以甲醇为例，色谱柱以C18为例）
“堵"的表现现象就是柱压异常升高，直接原因就是流路不畅。堵塞的主要位置就是在色谱柱的前端，最主要原因就是流动相里有杂质，杂质的主要来源就是细菌。

水中的细菌污染

一般的国产甲醇其实不需要额外过滤处理，直接使用没有问题。即使是有些固态微粒杂质，也能在液相流路系统最前端的过滤头上排除。而真正容易引起问题的，是水中的细菌。新制备的纯水在室内放置几天就会长菌，而这些细菌虽然肉眼不可见，却足以堵塞柱填料颗粒的空隙，造成柱子很快报废，所以更为重要的就是确保水的可靠性。

当然解决方法也比较简单，的方式当然是购买实验室专用纯水机，既方便又可靠，质量也放心。的缺点就是价格不菲。或者成箱购买市售品牌纯净水，如500ml 一支的娃哈哈。

从使用的实际情况来看有几点需要注意:
（1）流动相过滤实际操作时由于不可能做到专瓶专用，容易造成的交叉污染，对于配比复杂的流动相影响更大。所以用完后一定要冲洗干净。用前不放心的话也可以冲洗下。（2）流动相过滤经济成本比较高。买一套过滤装置要3000多元，且过滤器是比较容易损坏的设备。过滤片成本高，有些进口的一片就要几十元。按一般液相柱的正常使用寿命计算，过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本。并且在使用过滤片时，有些会造成流动相的二次污染，原因在于不合格的过滤片。
（3）流动相过滤耗费时间长。使用溶剂过滤器有一个预清洗、装备、使用、用后清洗，晾干的过程，至少也有一个小时的时间。这个成本也不能忽视。

流动相细菌污染

流动相刚开始没有长菌，在使用时却产生了细菌污染。这主要是在使用多元液相色谱仪时的一种不良使用习惯造成的。

举个例子：50％的甲醇水流动相，有两种使用方式。一种方式是在上机前就配好混合在一起，另一种方式是在流路A放纯甲醇，流路B放纯水。从单纯实验效果来说，后一种有明显的优点：首先是简单，不需要实验者另个计算配比混合，其次就是比例准确，能得到保留时间重复性的实验效果。
但是，它有一个致命的缺陷，就是纯水在流动相瓶中几天时间就会长细菌（很多情况下不仅仅用纯水作流动相，而是用缓冲盐溶液，本身就是优质肥料，细菌长得更迅速），一旦有细菌柱子就坏得很快。所以这种方式要操作人员每次实验都要用新制备的纯水，更要求在每次实验后把水相换掉，换成甲醇冲洗干净，这一点在实际工作中很多人意识不强，就是意识到了但多次使用中总有一两次会遗漏，但是往往这一两次就足以产生致命的影响。因为液相色谱柱的堵塞是不可逆的。

不适当操作造成

（1）在更换零件时选择的型号有误，接口不是很匹配，在拧紧的时候产生变形而使得管路堵塞。
（2）样品处理液净化得不干净，长期会在六通阀和柱之间形成阻塞不畅。
（3）在使用手动六通阀时，有些人可能由于手劲小的原因，转动的不到位，于是造成流路形成了死堵，压力快速升高超过警戒值。
（4）在使用金属管路作出废液管时，应当注意废液瓶中先放一些水，并把废液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且实验使用较高浓度的缓冲盐溶液，在停机时可能在出口端结晶成块并造成堵塞。这种情况不常见，但却的确发生过。

查找堵塞原因

绝大多数情况下，整个系统只会有一个地方发生堵塞。查堵的方法是从尾向前逆向分段拆开，仔细观察压力数值，如果某一个部件（柱子除外）装上和拆下时的压力差别很大，可根据变化判断。至于柱的堵塞，可以通过换同样规格的柱的压力是否一致来判断。

漏液与漏气

 一、漏液

（1）接头处漏液

  一般是色谱柱接头处漏液，可能是由于接头损坏、松动、接口不匹配等情况而造成漏液。这时只要检查接头是什么问题，就差不多了。接口损坏可以替换新的，松动就拧紧，如果是不匹配的问题，是用色谱柱配套的接头或者选用peek接头，适配性高。恒谱生PEEK螺纹色谱柱堵头接头通用且可重复使用、几乎兼容所有品牌色谱柱，低死体积连接，耐化学性不能与溶剂发生反应。恒谱生色谱柱接头系列有：PEEK 1/16“、1/8“、1/4“ 螺纹连接头，零死体积PEEK内/外螺纹连接两通；不锈钢1/16“、1/8“、1/4“ 螺纹连接头，不锈钢无死体积内/外螺纹连接两通；PEEK / 不锈钢压环。

（2）泵漏液

   泵头漏液一般都是由于密封不好引起的，首先要排查单向阀和接头是不是松动了，但是调整时也不能拧太紧，避免相互磨损造成损坏。

（3）进样阀漏液

  转子密封圈磨损太厉害或者已经损坏了而造成密封不严。这样的情况只能重新安装或更换进样阀。还有因为废液管产生虹吸或者堵塞，造成废液逆流的情况。此时需要保持废液管高于废液液面，或者更换、疏通废液管，保证废液排放正常。

二、漏气

（1）过滤头

抽液时，在流路管中有不规则但持续的小气泡产生，这时考虑的是流动相有没有脱气（需要特别提醒即使是有了真空脱气机也是要先超声脱气的，起码可以减少脱气机的工作压力并提高工作效率），如果已经脱了气，则要注意过滤头的污染也会造成这种现象。处理方法比较简单，拧下过滤头在稀硝酸中浸泡，超声半小时，洗净后装回去即可。

（2）透明流路管

指的是在过滤头和输送泵之间的那一段管路。这一个部分往往不是有点气泡，而经常是整个管中全是空气而操作人员却浑然不知，以致输送泵工作了半天才发现流动相瓶里的液体一点也没少。这也是我们常说的液相色谱仪至少一周要开机一次的原因（我们做液相一定要有“微渗"的概论）。如果长时间不用，这一段管路的液体会干掉，而充满空气的管路和充满液体的管路不仔细看是分辨不出来的。这种情况对于输送泵很危险，因为泵从设计来说是输送液体而不是输送气体，内部的液体对于活塞来说起到了机油的作用，如果活塞杆还残存了一些缓冲盐，则极易拉伤，造成不可逆转的影响。

对于这种情况，要以预防为主，每台机一周击至少作一次实验，如长期不用起码每周要冲流动相2 小时。养成良好的工作习惯很重要。