岛津LC-20AT液相色谱仪维护小知识

液相色谱以操作简单、分析周期短、分析范围广、定量分析结果准确、分析检出限低等优势，在食品添加剂、药物成分分析等多领域得到了广泛的应用。液相色谱仪是一种检测仪器，精密快速，为了能够长久持续有效地使用，这就要求操作人员需严格正确使用仪器，定期进行科学有效地维护。

仪器主要组成部分

高效液相色谱仪主要是由输液系统、进样器、色谱柱、检测器和色谱软件数据处理系统组成。

使用过程中注意事项

1、储液瓶存放符合要求的流动相（HPLC级，溶剂粘度小），并进行过滤、脱气处理。

目的是防止固体颗粒损伤仪器或柱头;未经过滤的溶剂或者溶剂瓶中生长微生物，都会降低溶剂入口过滤头的寿命，并影响泵的性能，一般要求两天过滤一次。

注意：过滤水相或有机相应该选用不同的滤膜。

2、缓冲液的使用

使用前必须过滤，使用后一定要对柱子进行清洗，以免造成腐蚀、磨损及阻塞:首先用5～10％的甲醇水溶液冲洗10-30 min（0.5-1 ml/min），再用甲醇冲洗30 min(0.1-0.5 ml/min)。

注意冲洗次序，不能直接用有机溶剂冲洗。

3、进行样品前处理

A、使用流动相溶解样品减少溶剂峰，尤其是组分峰靠近溶剂峰时尤为重要。保证样品在流动相中的溶解度，避免样品在系统中尤其在柱中产生沉淀。

B、进样前使用0.45um 的膜进行过滤，如果样品很脏，要使用0.2um的膜进行过滤。C、对于含有复杂基质的样品，过前处理小柱后再进样。

日常维护

1、保持仪器的环境（经常清洁仪器，尤其是灰尘）

系统中不要长期保存水和盐，长时间不用时应将仪器所有部分全部更换为70％以上的甲醇，避免细菌的滋生及盐的析出。

2、吸滤头堵塞

表现为管路中不断有气泡生成，措施：用异丙醇（或5％稀硝酸），超声波清洗，再用蒸馏水清洗。

3.泵的维护

含有缓冲盐的流动相不能保留在泵内，尤其是停泵过夜或更长时间。分析结束后一定要先用纯水冲洗泵（冲洗过程中需卸下色谱柱），然后再换合适溶剂冲洗（一般反相键合固定相，可以是甲醇或者甲醇和水溶液）。

4、定期清洗单向阀：将单向阀卸下，一般先用纯净水超声10分钟，然后用异丙醇超声10分钟。定期清洗吸滤头：将吸滤头卸下，用异丙醇超声10分钟。

5.定期冲洗检测池：把色谱柱卸下，在流速1.0ml/min的状态下先用纯净水冲洗30分钟，然后再用30%磷酸（色谱级）冲洗30分钟左右，再用超纯水冲洗至流出液为中性，最后用甲醇冲洗，待用。

6、色谱柱的日常保养

A、购买新柱后一定要仔细阅读说明书，确认柱的使用条件以及清洗再生步骤，按照说明书条件测试色谱柱柱效，记录使用压力。B、定期检测柱压和柱效。C、不同流动相之间转换时应注意溶剂的互溶性。D、确认样品不会在流动相中析出或带有固体不溶物，请使用0.45um或0.2um的一次性滤膜过滤样品，或者进行前处理。E、为了延长色谱柱使用寿命，请使用保护柱。F、定期用合适的溶剂清洗或再生色谱柱。G、长期不用时，清洗干净后，使用柱子说明书中指明的溶剂保存。柱子要从仪器上卸下并用堵头密封后保存。H、定期用合适的流动相清洗保存的柱子，避免干涸。

常见色谱问题

1、压力异常（偏高、偏低以及波动）

压力是液相色谱中最重要的指标，要经常关注压力的变化。不同溶剂即使在相同流速和温度的情况下压力也是不同的。建议操作者记下仪器正常状态时，在一定条件下（流速、温度）的压力显示值，每次做样分析时进行监测。

A、压力偏高

首先要确认是色谱柱堵塞还是系统堵塞色谱柱堵时：确认可能造成堵塞的样品的性质，相应选择合适的清洗溶剂。系统堵塞时：首先应确认是哪一部份堵塞，依据情况排除。

B、压力偏低

如果压力为零：（1）泵头中没有液体，而是充满了气泡；（2）单向阀堵死；（3）柱塞杆折断；（4）压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力)。如果有压力但是压力比正常时低：（1）漏液；（2）单向阀堵塞。

C、压力在短时间内剧烈波动

泵头中有气泡、单向阀脏、柱塞密封圈漏液。

2、漏液

经常漏液的部件：（1）泵（柱塞密封圈、排液阀）；（2）手动进样器（转子密封圈磨损）；（3）检测器（流通池窗口，垫片损坏，透镜破碎）；（4）接头处漏液（接头松动，接头脏，接头磨损，部件不匹配）

3、保留时间漂移

吸滤头脏、泵输液不正常（压力波动、气泡等）、流动相组分变化、流动相缓冲能力不够、色谱柱平衡时间不够、柱温的变化、柱子问题等。

4、基线问题（漂移、噪声）

A、噪音大

（1）流动相污染、变质或由低质溶剂配成

（2）有地方漏液

（3）流动相、泵、检测器流通池内有气泡

（4）流动相各溶剂不相溶或混和不均匀

（5）检测池能量不足

（6）流通池被污染

（7）温度影响（检测器和柱温差别太大）

（8）其他电子设备的影响

B、基线漂移

（1）流动相污染、变质或由低质溶剂配成

（2）流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂)

（3）温度波动

（4）柱子平衡时间不够

（5）流通池被污染或有气泡

（6）流通池窗口破裂

5、峰形异常

A、峰形问题

（1）死体积太大

（2）色谱柱问题（柱子被污染或堵塞、色谱柱塌陷）

（3）流动相缓冲不足或不合适

（4）样品溶剂选择不当，与流动相之间极性差异太大

（5）样品过载（浓度或体积）

（6）柱温过低

B、出现鬼峰

（1）流动相被污染

（2）进样阀残余峰

（3）样品中未知物

（4）色谱柱中的污染物