免疫组化—抗体的选择

1、一抗选择要点 
（1）选择单克隆还是多克隆抗体。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体，单克隆抗体能目标明确地与单一特异抗原决定簇结合，就象导弹地命中目标一样。另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对较低；而多克隆抗体特异性稍弱，抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等有所避免）。 
（2）种属来源。一般家兔来源的抗体多是多克隆；而小鼠来源的抗体多是单克隆，但也有另外。这条主要要与后面的二抗来源相匹配。 
（3）实验目的是检测什么种属的抗原，即species reactivity。这一点很重要，一般说明书上都有注明，如小鼠Ms、大鼠Rat、人Hum等等。 
（4）能否做免疫组化。一般一抗说明书都会注明做WB、IHC、ICC、IF等，建议选择注明的抗体，因为一般都是经过文章证明。 
（5）检测标本类型。用于检测石蜡切片还是冰冻切片，一般能做石蜡切片的抗体，可能都可以用来检测冰冻切片，但能做冰冻切片的抗体，不一定能检测石蜡切片中的抗原。 
（6）生产厂家。国外抗体生产商原装抗体质量一般没问题，尤其是美国Lifespan公司生产的IHCPlusAntibodies系列抗体，全部经过病理组织切片检测验证，质量保证，国内北京西美杰科技有限公司有售，就是价格有点贵；而国内分装厂家用的一抗工作液，价格便宜，但有时结果的稳定性和重复性稍差，不同批次重复性较差。 
（7）价格与质量的矛盾。我个人认为一抗原装质量可能会好点，因为许多一抗避免反复冻融，且在稀释液中稳定性较差（若时间长），但价格较贵。

2、二抗选择要点 
（1）种属来源。主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。 
（2）标记物的选择。有HRP、Biotin、荧光素等标记物。一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗，以与后面的SP结合反应；而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗，如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。这主要与后面有无三抗和三抗种类有关。 
（3）选择IgM还是IgG。一般一抗是IgM，那么二抗就选择IgM；反之，一抗是IgG，则二抗选择IgG。 
（4）生产厂家。一般SP三步法我们实验室选择中杉金桥的二抗染色试剂盒，内含有工作液的二抗，故试验中只需摸索一抗的浓度即可，效果还可以；而免疫荧光的二抗我一般选择Jackson ImmnoResearch公司，效果还不错。