技术分析：ELISA实验常见问题解答

吉林医药学院张老师前期在我司订购小鼠ELISA试剂盒，之后咨询我司相关问题，钱及时技术人员为张老师解答，解答详情如下：

1、为什么ELISA实验必须设置复孔？

答：为获得更准确的实验结果，强烈建议标准品及样本进行复孔检测，因为复孔检测可以：计算平均值，确保实验结果更准确；解决实验中误操作造成的跳孔现象；计算CV值，对实验的操作和试剂盒的精密度进行评估。

2、为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作？

答：温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA检测结果的不准确。

3、 重复性差是怎么回事？

答：对于这一点，很有可能是：

① 样品数量不一，加样时间长短不一（恒远来解决：重复某一样品时，加样时间尽可能与*次接近）。

③ 酶标仪滤光片不对或输入波长不对（恒远来解决：TMB显色用450/630波长）。

④ 酶标仪测定重复性差（恒远来解决：校对酶标仪）。

4、为什么标准曲线线性较差？ 

答：需要按照推荐方式保存标准品；溶解标准品之前需短暂离心，*收集粉末；确保标准品*溶解和混匀，然后再进行后续的系列稀释步骤，确保每一步都充分混匀且移液；显色的恰当终止；选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。