elisa试剂盒实验步骤

1. 血清收集保存： elisa试剂盒收集不抗凝血液3-5ml，保存4℃冰箱中，在恒温离心机中 以4℃，3500r离心10min，收集上层血清，以200ul/管分管编号冻存-80℃冰箱中。

 2. 包被：用包被液（CBS）稀释八种抗原至5ug/ml，以100ul/孔加入酶标板 中，空白孔加100ul/孔3%BSA+PBS.

3.. 封闭：弃上清液，加封闭液（5%BSA+PBST）200ul/孔，37℃放置2h。

4.. 洗涤：以洗涤液洗涤5次，5min/次。 elisa试剂盒加血清样品：将冻存血清逐级解冻至室温，将待测血清（1:30稀释于 1%BSA+PBST）中，以100ul/孔加入酶标本中，37℃放置2h，阴性对照孔加100ul/孔稀释液（1%BSA+PBST）.  

5.  洗涤：用洗涤液洗涤5次，5min/次。

6..  加酶标二抗：人抗IgG抗体-HRP,用1%BSA+PBST 液1：10000稀释，100ul/孔，37℃恒温箱温育2h。  

7. 洗涤：洗涤液洗涤5次，5min/次。  

8.  显色：加新鲜配制的底物（TMB：A液和B液等体积混合）100ul/孔。 10.  中止反应、比色：加50ul/孔中止液（2M H2SO4）， elisa试剂盒用酶标仪测定吸收值（450nm），根据P/N确定阳性值。 1 血清特异性IgE检测  小鼠检测完AHR后24h内处死动物，摘眼球取血，室温下静置30min，4℃4000rmp/min离心10min，小心吸取上层血清，分装-80℃保存备用。采用间4℃放 置过夜12h上。