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ELISA试剂盒因为净化进程中引入的溶剂,可能会下降待测组分的浓度或许不适宜直接剖析,需求去除悉数有机溶剂。即前处理进程中把样本在60℃氮气下吹干,再用复溶液溶解枯燥残留物。
浓缩方法:氮气吹干除杂、压缩空气吹干除杂。
留意:
1在吹干样本之前,用甲醇清洗针头,防止杂质搅扰。
2在吹样本时,针头应在液面上空,防止与样本触摸,防止发生穿插污染。
3样本吹干后应当即取下,防止吹的时刻过长,影响终究检测成果。
4不同的药物,吹干后样本的保质
期不同,提倡待样本回到室温后当即复溶。
5净化
通过提取的待测组分中一般含有一些会搅扰试剂盒中抗原抗体反响的杂质或许是含有与待测物结构类似的杂质。将待测组分与杂质分离的进程,我们称为ELISA试剂盒中样本的净化。
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反响孔中加0.1ml4℃过一夜。次日,ELISA试剂盒弃去孔内溶液,用洗刷缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗刷,下同)。
2.加样:加必定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反响孔中,置37℃孵育1小时。然后洗刷。(一起做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3.加酶标抗体:于各反响孔中,参加新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,ELISA试剂盒洗刷。
4.ELISA试剂盒加底物液显色:于各反响孔中参加暂时制造的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
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