细胞冻存的注意事项

细胞培养过程中，考虑到细胞株传代次数逐渐增加后，细胞变异的可能性将增大，继续培养的话细胞株可能会出现老化、状态下降、丢失一些该细胞的特性的现象，对后续实验造成影响；

此外，如果该细胞株特别珍贵，属于实验室重要资源，对细胞进行大规模的保存，能有效降低课题项目执行的风险;

最后，就是常见的风险规避问题，正所谓人有失手、马有失蹄，再熟练的实验操作者、再厉害的实验设备也是有出问题的可能，一旦出问题，意味着细胞资源的损失。

基于以上几点，细胞冻存对于一个实验室或个人来说，是非常必要的操作。

细胞冻存的注意事项：

1 在冻存之前，确保细胞状态良好。包括：细胞生长密度符合上述规定、细胞无污染、细胞形态良好没有变异。

2 DMSO可以溶解部分滤膜，如果要进行过滤，应该选择不会被DMSO降解的滤器，并且操作时务必带手套。

3 冻存管的管盖并不是拧得越紧越好，因为管盖内有O型橡胶圈，拧得太紧会让其变形，造成泄漏。当然，太松也会泄漏。

4 细胞冻存的密度应该要比传代时的密度要高得多，假如传代时的密度是1X10^ 5/mL，那么冻存时可以将密度提高到100倍。

等到了复苏后，再将密度稀释为1/20也依然能保持较高的生长密度，但与此同时，残留的DMSO对细胞的影响则会大大降低。

5 冻存应遵循慢冻，复苏则相反，应快速升温。慢冻的原因是为了避免降温时，细胞内的水分还未来得及脱离细胞，但却形成冰晶，对细胞造成损伤。

但也要注意，慢冻不等于无限制的缓慢降温，因为太慢，也会促成水分形成冰晶。理想的降温速度应该是1度/分钟的下降速度。