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166次进口elisa试剂盒方具体请参照以下步骤:
1.洗涤液:使用前配制好,有的试剂盒说明书会标明,配制好的洗涤液,在4度的条件下一般可以存放一个月;如果试剂盒说明书没有标明,尽量用新鲜的洗涤液,不需要多配制;
2.显色液:显色液一般分A液和B液,使用前15分钟配制好;
3.标准品:大部分ELISA试剂盒中的标准品是已经配制好的;还是4度保存,有的是需要现配制的,按照试剂盒说明书进行操作;
4.浓缩生物素结合的二抗和HRP:如果需要配制,试剂盒说明书没注明配好可以保存多久的话,尽量现配现用,还是一样,使用前15分钟配制;原则上是试剂盒说明书上没有指出配制物的储藏方式的话,应该现配现用;这个千万不要怕麻烦;还有小瓶的管子开盖前要离心,以免盖子上粘连以后总量不够用;
5.加 样:室温温育的试剂,特别是温育时间比较短的实验操作的试剂,加样对数据的影响比较大,特别要注意加样问题。
测定步骤:
1.随着病情的进展或由其他因素影响,某些抗体在机体内的含量发生大幅波动,因此有必要对标本进行预处理,例如对血清标本作适当稀释,或离心分离血脂等。间接法测定中,标本适当稀释还可降低非特异性反应。
2.加样一般使用加液器,在ELISA中一般有4次加样:加标本、加酶结合物、加底物和加终止液。加标本时必须每份标本使用一支移液器吸嘴,以免交叉污染。加酶结合物、底物和终止液时则不需更换吸嘴。
3.在成批手工检测中,还应注意操作时差的影响。加样及混匀时间的差异,使抗原抗体反应和酶促反应时间不一致,对竞争法及定量检测影响很大,不注意可能会导致错误结果或定量不准。
4.洗涤是ELISA操作过程中决定实验成败的一个关键步骤。目的是除去未结合的免疫反应物,终止抗原抗体反应,除去标本中与反应无关的成分、游离的酶标物以及反应过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。可用洗板机洗板或手工洗板,前者洗涤质量较好,各反应孔洗涤效果均一,批内、批间差异小,手工洗板应注意控制各孔洗涤效果,差异不宜太大。
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