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104次elisa分析检测试剂盒实验时应该*的条件
1.进口Elisa试剂盒固相载体的选择载体的种类很多,其中包括纤维素、交联右旋糖酐、葡萄球菌聚苯乙烯、聚丙烯酰胺等。从使用形式上可有凹孔平板、试管、珠粒等。
聚苯乙烯凹孔板是应用zui广泛的一种载体。聚苯乙烯塑料微量滴定板吸附蛋白的性能好,操作简便、用量小,适于大批检查。
由于聚苯乙烯的工艺过程不够稳定,造成各批次差异较大。所以进行ELISA之前,必须进行筛选。检查方法:
⑴ 吸附性能的检查:先加抗体包被,然后加入同一稀释度的酶标抗体,zui后加底物、显色、测OD值,求出总平均OD值,再求出每相邻两孔的OD平均值,此均值在总均值的±10%以内为合格,若中间孔与四周孔OD值相差太大,或一侧与另一侧孔OD值相差较大均属不合格。
⑵ 对比测定阳性血清与阴性血清,观察是否存在明显差异,若二者OD值相差于10倍以上者为合格。
板的处理。新板一般不用处理,用蒸馏水冲洗即可应用。板用一次即废。但不少实验工作者认为用超声波处理,清洁液Tritonx100、20%乙二醇处理仍可应用。但发现空白对照显色较深和阳性样品显色结果不理想时,应弃去不用。
2.载体的吸附条件 载体的吸附均为物理吸附。吸附的多少取决于PH值、温度、蛋白浓度、离子强度以及吸附时间等。
较好的吸附条件是:离子强度为0.05Mol/L~0.10Mol/L,pH9.0~pH9.6碳酸盐缓冲液,蛋白浓度为1µg/ml~100µg/ml,4℃过一夜或37℃3h。
3.酶标抗体使用浓度的确定于聚苯乙烯板孔中加足够量的抗体包被,温育一定时间,冲洗、把酶标结合物倍比稀释,每个稀释度加2孔,温育、冲洗、再加底物显色、比色。以OD值为纵坐标,酶标结合物的稀释度为横坐标,制作曲线。找出OD值为1时,相对应的酶标抗体稀释度为zui适酶标抗体稀释度。
这个稀释度是指在这种条件下的zui适稀释度,换个条件就不是zui适的了。如1﹕400的酶标抗体稀释度温育6h可与1︰6 400稀释度温育24h结果相同。所以一旦条件确定之后,就不要变更,以保证结果的重复性和相对的准确性。
elisa分析检测试剂盒大鼠整合素样金属蛋白酶17(ADAM17)ELISA试剂盒 ,英文名: ADAM17 ELISA Kit
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大鼠粘蛋白/粘液素C(MUCC)ELISA试剂盒 ,英文名: MUCC ELISA Kit
大鼠粘蛋白/粘液素1(MUC1)ELISA试剂盒 ,英文名: MUC1 ELISA Kit
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大鼠载脂蛋白H(Apo-H)ELISA试剂盒 ,英文名: Apo-H ELISA Kit
大鼠载脂蛋白E(Apo-E)ELISA试剂盒 ,英文名: Apo-E ELISA Kit
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大鼠载脂蛋白B100(Apo B100)ELISA试剂盒 ,英文名: Apo B100 ELISA Kit
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大鼠载脂蛋白A1前体(Pre-Apo-A1)ELISA试剂盒 ,英文名: Pre-Apo-A1 ELISA Kit
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大鼠孕酮受体(PROGR)ELISA试剂盒 ,英文名: PROGR ELISA Kit
大鼠孕酮受体(PGR)ELISA试剂盒 ,英文名: PGR ELISA Kit
大鼠孕激素/孕酮(PROG)ELISA试剂盒 ,英文名: PROG ELISA Kit
大鼠诱导型一氧化合成酶(iNOS)ELISA试剂盒 ,英文名: iNOS ELISA Kit
大鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA试剂盒 ,英文名: iNOS ELISA Kit
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