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152次elisa分析检测试剂盒实验稳定性强
1.实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位,ELISA试剂盒或在微克、甚至纳克水平上对其进行定量。
2.其抗原抗体反应具有高度的特异性。
3.将酶催化反应的放大作用和抗原抗体亲和反应的高度专一性、特异性相结合,以酶标记的抗原或抗体作为主要试剂进行免疫测试,所以具有很高的灵敏度。
验总结:
1、包被原的性质很重要,蛋白浓度,是否降解,这关系到你做出的抗体可不可以被其识别,所以保存抗原很重要,我做重组蛋白时,师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。还有有的包被原可能不是蛋白,对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被,我把方法简要的列出如下:①亲和素生物素:先亲和素先包被载体,加入生物素化的DNA,这种包被方法均匀、牢固,已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。②脂类物质:可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,开盖置冰箱guo ye或冷风吹干,待酒精挥发后,让脂质自然干固在固相表面。③小分子必须依靠和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。
2、包被液的选择,一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。应注意以下原理:由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用,这种物理吸附是非特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体表面。具体的试验还要有坚固的理论外也要实践,看一下*终可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液,还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
3、封闭:继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙,从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。常用封闭剂有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉,比较价廉,可以高浓度使用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰)和酪蛋白等等。但*终选用什么,要依据试验具体来实践。
4、洗涤板:可以说在ELISA操作中,洗涤是*主要的关键技术。因为聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的,清除残留在板孔中游离的物质,以及非特异性地吸附的干扰物质,在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。所以在洗板时会有一定误差,人为因素很大(当然有条件的用洗板机除外),洗的不*或串了孔,对如此灵敏的ELISA系统可是不小的影响。
5、加抗体标本(和二抗):注意该换枪头时换枪头。标本稀释一般可用pbs稀释,也可用封闭液去稀释。如需加二抗,还要注意二抗的工作浓度,太高浪费,太低则着色浅。
6、显色:显色系统又很多,我们一开始做的时候,要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵,AP结合物可加叠氮钠。
7、每次做尽量要把阴阳空三个对照做好,如出现问题也好分析。
elisa分析检测试剂盒小鼠分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)ELISA试剂盒 ,英文名: SFRP2 ELISA Kit
小鼠分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)ELISA试剂盒 ,英文名: SFRP1 ELISA Kit
小鼠分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)ELISA试剂盒 ,英文名: SCG2 ELISA Kit
小鼠肺部激活调节趋化因子(PARC)ELISA试剂盒 ,英文名: PARC ELISA Kit
小鼠腓骨蛋白7(FBLN7)ELISA试剂盒 ,英文名: FBLN7 ELISA Kit
小鼠肥胖抑制素(OB)ELISA试剂盒 ,英文名: OB ELISA Kit
小鼠肥大细胞类糜蛋白酶1(CMA1)ELISA试剂盒 ,英文名: CMA1 ELISA Kit
小鼠防御素β2(DEFβ2)ELISA试剂盒 ,英文名: DEFβ2 ELISA Kit
小鼠防御素β1(DEFβ1)ELISA试剂盒 ,英文名: DEFβ1 ELISA Kit
小鼠防御素α5(DEFα5)ELISA试剂盒 ,英文名: DEFα5 ELISA Kit
小鼠防御素α1(DEFα1)ELISA试剂盒 ,英文名: DEFα1 ELISA Kit
小鼠芳香烃受体核转位因子(ARNT)ELISA试剂盒 ,英文名: ARNT ELISA Kit
小鼠芳香烃受体(AhR)ELISA试剂盒 ,英文名: AhR ELISA Kit
小鼠泛素结合酶E2A(UBE2A)ELISA试剂盒 ,英文名: UBE2A ELISA Kit
小鼠泛素(Ub)ELISA试剂盒 ,英文名: Ub ELISA Kit
小鼠泛醌细胞色素C还原酶核心蛋白Ⅱ(UQCRC2)ELISA试剂盒 ,英文名: UQCRC2 ELISA Kit
小鼠翻译调节肿瘤蛋白1(TPT1)ELISA试剂盒 ,英文名: TPT1 ELISA Kit
小鼠法尼酯X受体(FXR)ELISA试剂盒 ,英文名: FXR ELISA Kit
小鼠二酰基甘油(DAG)ELISA试剂盒 ,英文名: DAG ELISA Kit
小鼠二酰甘油-O-酰基转移酶同源物1(DGAT1)ELISA试剂盒 ,英文名: DGAT1 ELISA Kit
小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPP4)ELISA试剂盒 ,英文名: DPP4 ELISA Kit
小鼠二肽基肽酶9(DPP9)ELISA试剂盒 ,英文名: DPP9 ELISA Kit
小鼠二肽基肽酶8(DPP8)ELISA试剂盒 ,英文名: DPP8 ELISA Kit
小鼠二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)ELISA试剂盒 ,英文名: DHODH ELISA Kit
小鼠二氢嘧啶脱氢酶(DPYD)ELISA试剂盒 ,英文名: DPYD ELISA Kit
小鼠二氢硫辛酸转乙酰基酶(DLAT)ELISA试剂盒 ,英文名: DLAT ELISA Kit
小鼠二氢硫辛酸脱氢酶(DLD)ELISA试剂盒 ,英文名: DLD ELISA Kit
小鼠二级淋巴组织趋化因子(SLC)ELISA试剂盒 ,英文名: SLC ELISA Kit
小鼠儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)ELISA试剂盒 ,英文名: COMT ELISA Kit
小鼠腭/肺/鼻上皮癌关联蛋白(PLUNC)ELISA试剂盒 ,英文名: PLUNC ELISA Kit
小鼠多效生长因子(PTN)ELISA试剂盒 ,英文名: PTN ELISA Kit
小鼠多配体蛋白聚糖1(SDC1)ELISA试剂盒 ,英文名: SDC1 ELISA Kitelisa分析检测试剂盒
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