人1,4,5-三磷酸肌醇（IP3）酶联免疫分析试剂盒实验原理及操作步骤

             人1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)酶联免疫分析试剂盒实验原理及操作步骤

检测范围： 96T

3.0 ng/ml - 120ng/ml

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)含量。实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)水平。用纯化的人1,4,5- 三磷酸肌醇(IP3)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)，再与 HRP 标记的 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人 1,4,5-三磷酸肌醇(IP3) 浓度。

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，然后再加待测样品 10µl（样品终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8. 洗涤：操作同 5。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15 分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。