L-苹果酸（L-MA）试剂盒使用说明书

                                                 L-苹果酸(L-MA)试剂盒使用说明书

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中 L-苹果酸(L-MA)水平。用纯化的   L-苹果酸

(L-MA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 L-苹果酸(L-MA)，

再与 HRP 标记的 L-苹果酸(L-MA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗

涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终

的黄色。颜色的深浅和样品中的植物 L-苹果酸(L-MA)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下

测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中 L-苹果酸(L-MA)浓度。

2.      加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl，

然后再加待测样品 10µl（样品终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽

量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.      温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.      配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6.      加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。

7.      温育：操作同 3。

8.      洗涤：操作同 5。

9.         显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

10 分钟.

10.    终止：每孔加终止液 50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.    测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。  测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标

准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，