Bcl-2 试剂盒

       Bcl-2 试剂盒

该试剂盒以 HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，
HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性 B 细胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)
抗原。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的
B 细胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异
性结合，后加入 HRP-SA，形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合
物，显微镜下观察成像。 石蜡包埋组织切片免疫染色

实验步骤（建议方案）： 
石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度 
1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr； 
2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min； 
3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%
乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min； 
4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温
度达到 98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×
2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附 1）* 注：有些抗原勿需修复，
直接进入第 5 步封闭。 
5.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 30 min； 
6.加一抗：滴加用试剂 C（即用型一抗），37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜； 
7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）； 
8.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 10 min； 
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂 D），37℃湿盒中孵育
30 min； 
10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）； 
11.封闭： 滴加试剂 Tween 20，37℃湿盒孵育封闭 20 min； 
12.加 HRP-SA： 滴加用试剂 C 稀释的试剂 E（1：50~200，终浓度 5~20 nM），37
℃湿盒中孵育 30 min； 
13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）； 
14.显色：应用 DAB 溶液（试剂 F）显色； 
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明； 

16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片； 
17.观察成像： 显微镜下观察成像。 

试剂盒所含试剂： 

试剂 A 通透液：0.1% Triton-X 100   10 mL（选用） 
试剂 B 2 瓶封闭缓冲液（封闭用） 10ml/瓶 
试剂 C （*分装）已稀释的即用型 bcl-2 一抗（2.5ml） 
试剂 D （*分装）生物素化羊抗兔 IgG 1 支 
（浓度 1.5 mg/mL，稀释比为 1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液 20ml 
试剂 E  HRP-SA 复合物 1 支（浓度 1 μM，稀释比 1:50~1:200）100 μL 
试剂 F  DAB 显色液 5ml 
用户自备试剂： 
1． 10mM TBS（pH7.2~7.4） 
三羟基氨基甲烷 1.21g 
 

加蒸馏水 800mL，浓盐酸调 pH 值至 7.2~7.4，后定容至 1000mL 
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比） 
2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液） 
10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液 
柠檬酸 0.38g 
柠檬酸三钠 2.45g 
加蒸馏水 900mL，浓盐酸调 pH 值至 6.0，后定容至 1000mL 
或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0） 
EDTA·2H2O 186.1g 
柠檬酸三钠 2.45g 
加蒸馏水 700mL，用 10mM NaOH 调 pH 值至 8.0，后定容至 1000Ml 
3. 缓冲甘油封固剂 10 mL 
4. Tween 20 5 mL 

石蜡包埋组织切片免疫染色

实验步骤（建议方案）： 
石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度 
1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr； 
2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min； 
3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%
乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×2min； 
4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温
度达到 98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗 2×
2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附 1）* 注：有些抗原勿需修复，
直接进入第 5 步封闭。 
5.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 30 min； 
6.加一抗：滴加用试剂 C（即用型一抗），37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜； 
7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）； 
8.封闭： 滴加试剂 B，37℃湿盒孵育 10 min； 
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂 D），37℃湿盒中孵育
30 min； 
10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）； 
11.封闭： 滴加试剂 Tween 20，37℃湿盒孵育封闭 20 min； 
12.加 HRP-SA： 滴加用试剂 C 稀释的试剂 E（1：50~200，终浓度 5~20 nM），37
℃湿盒中孵育 30 min； 
13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）； 
14.显色：应用 DAB 溶液（试剂 F）显色； 
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明； 

16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片； 
17.观察成像： 显微镜下观察成像。 
注意事项： 
1. 修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致
结晶或抗原封闭。 
2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使
用。 
3. 若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。 
4. 封片前一定要换用 TBS 充分洗涤，以便洗去组织上残留的 Tween 20，否则会
影响结果观察。 
5. 如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封
片。