小鼠 ELISA 检测试剂盒方法

                                     小鼠 ELISA 检测试剂盒方法

    小鼠 ELISA试剂盒是夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知小鼠 ELISA死因子浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将小鼠 ELISA和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中小鼠 ELISA子的浓度呈比例关系。

样品收集、处理及保存方法

1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、 组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液

5、 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备

1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：

360pg/ml （5号标准品） 150ul的原倍标准品加入150ul的标准品稀释液

180pg/ml （4号标准品） 150ul的5号标准品加入150ul的标准品稀释液

90pg/ml （3号标准品） 150ul的4号标准品加入150ul的标准品稀释液

45pg/ml （2号标准品） 150ul的3号标准品加入150ul的标准品稀释液

22.5pg/ml （1号标准品） 150ul的2号标准品加入150ul的标准品稀释液

0pg/ml （空白对照） 原始浓度不用稀释直接加入50ul。

 2． 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。