细胞色素P450Ⅱj3抗体 返回列表页

免疫荧光技术的实验步骤：
一、准备好试剂与仪器：
磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。
二、实验步骤
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，十分钟后弃去，使标本保持一定湿度。
2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其*覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间以三十分钟为参考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分钟，并不停地摇晃振荡。
4.取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。
5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
详细介绍：

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抗体的制备过程：
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白，通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白，纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原，常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等，大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血，家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血，家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定得到的抗血清需要进一步的纯化，利用偶联了抗原的亲和柱进行层析，具有高效，特异性强，纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。5. 免疫血清的保存建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价，而真空干燥保存时间可以更久。产品仅用于科研保存前需经除菌并添加防腐剂。
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抗体的生活习性：
(1)结合特异性抗原：抗体与其他免疫球蛋白分子区别，就在于抗体能与相应抗原发生特异性结合，在体内导致生理或病理效应;在体外产生各种直接或间接的可见的抗原抗体结合反应。抗体是靠其分子上的特殊的结合部位与抗原结合的。
(2)激活补体：抗体与相应抗原结合后，借助暴露的补体结合点去激活补体系统、激发补体的溶菌、溶细胞等免疫作用。
(3)结合细胞：不同类别的免疫球蛋白，可结合不同种的细胞，产生不同的疚，参与免疫应答。
(4)可通过胎盘及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中，使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)产品仅用于科研具有抗原性：抗体分子是一种蛋白质，也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗体对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同：不耐热，60～70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质，均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在生产上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白，再经透析法将其纯化。
冻干血浆成骨细胞培养基虹膜色素上皮细胞factor VIII  第八因子相关抗原(多肽片断抗原)

DNA酶琼脂软骨细胞培养基晶状体上皮细胞FAS (Apo-a1; CD95;)(抗原)  载脂蛋白-a1

7.5%肉汤滑膜细胞培养基角膜上皮细胞Agrin peptide  聚集蛋白抗原

7.5%肉汤髓核细胞培养基角膜内皮细胞Agtr1/AT1a(Angiotensin II receptor, type 1a)  血管组织血管紧张素Ⅱ1型受体抗原

普通肉汤培养基肝细胞培养基视网膜神经节细胞FasL(抗原)  

亚碲酸钠肉汤培养基基础星形细胞培养基骨细胞Ah Receptor(Aryl Hydrocarbon Receptor)  芳香烃受体抗原

葡萄球菌增菌肉汤心肌细胞培养基滑膜细胞Fe65 protein peptide  Fe65 蛋白（多肽抗原）

葡萄球菌选择性琼脂滋养层细胞培养基骨骼肌细胞FGF1 (aFGF )(ECGF-beta)(HBGF-1)  肝素结合生长因子( 酸性成纤维细胞生长因子）（多肽片断抗原）

Gentamicin/FITC  荧光素标记庆大霉素IgG膜糖蛋白CD2002-羟基-5-三氟甲基吡啶Rat PTH (Parathyroid Hormone) 检测试剂盒

GFAP/FITC  荧光素标记胶质纤维酸性蛋白IgG胰羧肽酶A12-羟基-5-三氟甲基吡啶Rat PTHR2 (Parathyroid Hormone Receptor 2) 检测试剂盒

GFP/FITC  荧光素标记绿色荧光蛋白IgG羧肽酶A23,6-二溴-9-乙基咔唑Rat PTHRP (Parathyroid Hormone Related Protein) 检测试剂盒

GFP/FITC  荧光素标记绿色荧光蛋白IgG脑源性免疫球蛋白超家族蛋白33,6-二溴-9-乙基咔唑Rat PDAP1 (Pdgfa Associated Protein 1) 检测试剂盒

GFP/FITC (Green Fluorecent protein)  荧光素标记兔抗绿色荧光蛋白IgG胰羧肽酶B1(3-氯-2-羟基)*基氯化铵 溶液Rat PTD (Pentosidine) 检测试剂盒

human Fibrinogen/Biotin  生物素化兔抗人纤维蛋白原细胞维甲酸结合蛋白2(3-氯-2-羟基)*基氯化铵 溶液Rat PP (Pepsin) 检测试剂盒

GFR Alpha-1/GDNF /FITC  荧光素标记GDNF家族受体α-1IgG2号染色体开放阅读框802,5-二甲氧基二Rat PYY (Peptide YY) 检测试剂盒

GFRA4/FITC  荧光素标记GDNF家族受体α-4IgG磷酸化CD32B2,5-二甲氧基二Rat PRF1 (Perforin 1) 检测试剂盒  
细胞色素P450Ⅱj3抗体酿酒酵母Mouse PAL (L-Phenylalanine ammonla-lyase)  Kit

副猪嗜血杆Mouse LHRH (Luteinizing Hormone-Reasing Hormone)  Kit

强壮类芽孢杆Mouse LFA-3 (lymphocyte function associated antigen 3)  Kit

费希尔曲霉Mouse Lptn/XCL1 (Lymphotactin)  Kit

酿酒酵母Mouse LZM (Lysozyme)  Kit

栗疫Mouse BSP (Bone Sialoprotein)  Kit

米曲霉Mouse MIP-1δ (Macrophage Inflammatory Protein 1δ)  Kit

J53大肠Mouse FPN (Ferroportin)  Kit