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免疫荧光技术的实验步骤:
一、准备好试剂与仪器:
磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。
二、实验步骤
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,十分钟后弃去,使标本保持一定湿度。
2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其*覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间以三十分钟为参考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分钟,并不停地摇晃振荡。
4.取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
详细介绍:
产品名称 | 20号染色体开放阅读框118抗体 |
英文名称 | C20orf118 |
货号 | BJ-K8163 |
抗体的制备过程:
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。5. 免疫血清的保存建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。产品仅用于科研保存前需经除菌并添加防腐剂。
抗体的生活习性:
(1)结合特异性抗原:抗体与其他免疫球蛋白分子区别,就在于抗体能与相应抗原发生特异性结合,在体内导致生理或病理效应;在体外产生各种直接或间接的可见的抗原抗体结合反应。抗体是靠其分子上的特殊的结合部位与抗原结合的。
(2)激活补体:抗体与相应抗原结合后,借助暴露的补体结合点去激活补体系统、激发补体的溶菌、溶细胞等免疫作用。
(3)结合细胞:不同类别的免疫球蛋白,可结合不同种的细胞,产生不同的疚,参与免疫应答。
(4)可通过胎盘及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中,使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)产品仅用于科研具有抗原性:抗体分子是一种蛋白质,也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗体对理化因子的抵抗力与一般球蛋白相同:不耐热,60~70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质,均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在生产上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白,再经透析法将其纯化。
BactoTM Agar人小脑颗粒细胞微小RNA2-氟-4--5-甲基吡啶GPR30(G Protein Coupled Receptor 30) G蛋白偶联受体30抗原
平板计数琼脂人海马趾神经元微小RNA2-氟-4--5-甲基吡啶GnRHR peptide 促性腺激素释放激素受体抗原
Plate Cou Agar人少突胶质前体细胞微小RNA乙氧甲酰基三基溴化膦KiSS-1R/GPR54/GPCR54(KiSS-1 receptor/G-Protein Coupled Receptor 54) G蛋白偶联受体54抗原
R2A琼脂人少突胶质前体细胞-悬浮生长微小RNA乙氧甲酰基三基溴化膦GRK2/BARK1 (G-protein coupled receptor kinase 2) G蛋白偶合受体激酶2抗原
R2A Agar人雪旺细胞微小RNA乙氧甲酰基三基溴化膦GRM2/GLUR2 (Glutamate Receptor Metabotropic 2) 促代谢型谷氨酸受体2抗原
m HPC琼脂人神经束膜细胞微小RNA六氟-2,4-戊二酮铝GRP78(glucose regulated protein 78) 葡萄糖调节蛋白78抗原(热休克蛋白70蛋白5)
m-HPC Agar人星形胶质细胞微小RNA六氟-2,4-戊二酮铝GSK-3 Alpha (Glycogen Syhase Kinase-3 alpha) 葡萄糖合成激酶-3α抗原(多肽抗原)
D/E中和琼脂人小脑星形胶质细胞微小RNA双氯芬酸phospho-GSK-3 Beta(pSer9) 磷酸化葡萄糖合成激酶-3β抗原
lamin A/FITC 荧光素标记核纤层蛋白AIgG高分子量角蛋白ToceranibPorcine ALB (Albumin) 检测试剂盒
Laminin Beta1/FITC 荧光素标记层粘连蛋白β1IgG22号染色体开放阅读框39N-羟基-异丁酰胺Porcine HP (Haptoglobin) 检测试剂盒
lamin B/FITC 荧光素标记核纤层蛋白BIgG周期素GN-羟基-异丁酰胺Porcine CRP (C-Reactive Protein) 检测试剂盒
lamin C/FITC 荧光素标记核纤层蛋白CIgGCrk p38铬蓝Porcine PLG (Plasminogen) 检测试剂盒
Phospho-Lamin A/C (Ser22) /FITC 荧光素标记磷酸化核纤层蛋白A/CIgG磷酸化Crk p38铬蓝Porcine FBG (Fibrinogen) 检测试剂盒
LAIR-1/CD305/FITC 荧光素标记白细胞相关免疫球蛋白样受体1IgG核心结合因子α1(成骨特异性转录因子)Cbfα1铬蓝Porcine MYO (Myoglobin) 检测试剂盒
LAIR-2/CD306/FITC 荧光素标记白细胞相关免疫球蛋白样受体2IgG胆囊收缩素8五氟酸酐Porcine FABP3 (Fatty Acid Binding Protein 3, Muscle and Heart) 检测试剂盒
Langerin/CD207/FITC 荧光素标记白细胞分化抗原CD207IgG细胞表面趋化因子受体1五氟酸酐Porcine IL-6 (Ierleukin 6) 检测试剂盒
20号染色体开放阅读框118抗体镰刀Mouse FETUA (Fetuin A) Kit
黄曲霉*Mouse SDC1 (Syndecan 1) Kit
*灰葡萄孢Mouse IGFBP5 (Insulin Like Growth Factor Binding Protein 5) Kit
漫游孢囊属Mouse ApoA2 (Apolipoprotein A2) Kit
枯草芽孢杆 BMouse ApoC3 (Apolipoprotein C3) Kit
稻麦穗孢霉Mouse CYP2E1 (Cytochrome P450, family 2, subfamily E, polypeptide 1) Kit
无花果曲霉Mouse MOG (Myin Oligodendrocyte Glycoprotein) Kit
刺芹侧耳(杏鲍菇)Mouse AZGP1 (Zinc-alpha-2-glycoprotein) Kit
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