Equi-phi29 DNA Polymerase 返回列表页

商品属性：

是 phi29 的改造体，并经多次纯化分离而得。在保留了 phi29 DNA 聚合酶的链置换、连续合成特性（>70kb）的基础上，提高了滚环扩增的反应温度，该酶酶可以在 42 度条件下持续的进行 DNA 合成（而 phi29 DNA 聚合酶在此温度下反应活性很低）。

这种高温的反应特性，在以下几个方面对实验有明显的提升：

（1）在 NGS 测序中，其提升了高 GC 含量、回文结构等复杂模板的延伸能力，使得 NGS 的覆盖度更均一，降低测序所需深度；

（2）高温的反应条件，提升了基因组 DNA的 WGA 产物的合成量，并可以进行变温扩增；

（3）降低测序中 Gap 区域，提升单细胞测序的数据质量和完整度；

（4）降低非特异性扩增产物；

（5）提升 MDA/RCA 等实验的扩增性能和特异性。
除此外，该酶仍然具有很强的 3’→5’外切酶校读功能，合成的 DNA 片段保真性高。该酶的外切酶活性较强，因此合成过程中引物需要 3’端硫代修饰，以降低外切活性对引物的切割效应。

储存：-20℃可保存 3 年。
注意：在不同的实验类型中，Oligo根据实验需要自行选择。
2. 引物和模板退火：体系配制完毕后，放置到 PCR 仪中，95℃ 3min，25℃ 3min。3. 退火完毕后，向退火产物中加入 1μl Equi-phi29 DNAPolymerase，混合均匀。
4. 扩增反应
4.1 恒温扩增
对于环状DNA模板采用恒温反应作为推荐使用30℃恒温扩增，30℃孵育 6~16h.该酶在 30-42℃条件下均可工作，
必要时根据实验类型进行调整。
4.2 变温扩增
对于基因组 DNA 或 cDNA 模板，推荐使用变温扩增反应，以在短时间内获得更高产量，并提高了低浓度模板的扩增产量。在 PCR 仪上做如下设置：
【30℃ 5min；42℃ 15s】循环 72 次（约 6h）或 120次（约 10h）.必要时，反应结束后，可于 65°C 10min 进行失活反应。
使用注意事项
（1）必要时可单独额外添加终浓度 1 mM DTT 和 0.2mg/ml BSA，可提高反应效率。
（2）该酶的最佳反应温度为 42 ℃ （在 30~42℃之间均有活性）。
（3）65℃ 10min 即可使该酶失活。
（4）根据实验类型需要，调整dNTP的浓度100~500 μM。
（5）添加 Yeast Pyrophosphatase可提高 DNA 产量。
（6）反应引物 3’端的硫代修饰可避免引物降解。

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