组织 / 细胞基因组 DNA 快速提取试剂盒 返回列表页

商品属性：

保存条件：本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

产品介绍：
结合液/蛋白酶 K 迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组 DNA 在 高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的 步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲 液将纯净基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。
产品特点：
1.重复性好:离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值达 1.7～1.9，长度可达 30kb -50kb，可直接用于 PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。
注意事项：
1.结合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 37℃水浴几分 钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

 2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化。
 3.结合液 CB 和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4.洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保批 pH 大于 7.5，pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱 DNA 应该保存在-20℃。 DNA 如果需要长期保存，可以用 TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是 EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
自备试剂：无水乙醇、1xPBS 缓冲液、RNase A（10mg/ml）（RNase A(10 mg/ml) 有售）。
操作步骤：
提示：第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
如果需要去除 RNA，可在加蛋白酶 K 溶液前先加入 4μl RNaseA（10mg/ml）溶液振荡 15sec，室温放置 5 min

1.组织培养细胞
a. 收集约 105-10
6悬浮细胞到一个 1.5ml 离心管；对于贴壁细胞，应该先用胰蛋白消化后吹打下来收集。
b. 12,000rpm 离心 10 sec，使细胞沉淀下来。弃上清，留下细胞团和大约 10-20μl残留的液体。
c. 加 200μl 1×PBS 重悬洗涤细胞，12,000rpm 离心 10 sec，使细胞沉淀下来。弃上清, 将细胞沉淀重悬于 180μl 1XPBS 中。
d. 加入 20μl 蛋白酶 K (20mg/ml)溶液，充分混匀（可选步骤：为清除 RNA，加入 5µl RNase A（10mg/ml），振荡混匀，可选择室温放置 5min），再加入 200μl结合液 CB，立刻涡旋振荡充分混匀，在 70℃放置 10 min。
e. 冷却后入 200μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
f. 将上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入吸附柱 AC 中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm 离心 1 min，倒掉收集管中的废液。
g. 按操作步骤 4 继续后续的实验。
2.动植物组织（例如鼠肝脑或者植物叶片）
a. 新鲜或者解冻的组织在液氮中研磨成细粉后或者用解剖切成小碎块（切成微块可以提高产量）后取 20-50mg，转入装有 180μl 组织裂解液 TL 的 1.5ml 离心管中， 用大口径枪头吹打混匀。
b. 加入 20μl 的蛋白酶 K 溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。
c. 将裂解物放置在 55℃水浴 1-3 小时或者直到组织消化全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。为清除 RNA，加入 5µl RNase A（10mg/ml），振荡混匀（可选择室温放置 5 min）。
d. 加入 200μl 结合液 CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置 10 min。
e. 冷却后加入 200μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
f. 用 1ml 的枪头吸取混合物，将混合物加入一个吸附柱 AC 中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm 离心 1 min，倒掉收集管中的废液。
g. 按操作步骤 4 继续后续的实验。
3.动物组织（鼠尾）
a.将 0.2-0.5cm 的鼠尾巴尖(即 20-50mg)剪碎（一定要剪 0-2cm 范围内的尾巴尖，否则裂解效果不好），或者在液氮中研磨组织成细粉后，转入装有 180μl 组织裂解液 TL 的 1.5ml 离心管中， 用大口径枪头吹打混匀。
b.加入 20μl 的蛋白酶 K(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。
c.将裂解物放置在 55℃水浴 3 小时或者直到组织消化全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。为清除 RNA，加入 5µl RNase A（10mg/ml），振荡混匀（可选择室温放置 5 min）。
d.用一个 1ml 不带针头的一次性输液抽打裂解物 2-3 次。
e.加入 200μl 结合液 CB 和 200μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。
f.12,000rpm 离心 5 min，将上清加入一个吸附柱 AC 中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm 离心 30-60 sec，倒掉收集管中的废液。
g.按操作步骤 4 继续后续的实验。
4.加入 500μl 抑制物去除液 IR，12,000rpm 离心 30 sec，弃废液。
5.加入 500μl 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心 30 sec，弃掉废液。
6.重复操作步骤 5。
7.将吸附柱 AC 放回空收集管中，12,000rpm 离心 2 min，将吸附柱置于室温放置数分钟，以晾干吸附材料中残余的漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
8. 取出吸附柱 AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 50-100 洗脱缓冲液 EB（洗脱缓冲液事先在 65℃水浴中预热效果更好），室温放置 3-5 min，12,000rpm 离心 1 min。为了增加基因组 DNA的得率，将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置 2 min，12,000rpm 离心 1 min。(注意: DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA降解。)

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