人血红素加氧酶1Elisa Kit说明书 返回列表页

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人血红素加氧酶1（HO-1）Elisa KitHuman heme oxygenase1,HO-1 ELISA Kit
人血红素加氧酶1Elisa Kit说明书【实验用途】血红素加氧酶(heme oxygenase-1,HO-1)是一种广泛存在的抗氧化防御酶,是热休克蛋白家族中的一个成员,可代谢血红素生成CO、胆红素和游离铁.在大多数组织内呈低水平表达,可被多种伤害性刺激包括血红素、高氧、缺氧、热休克、内毒素、过氧化氢、细胞因子、紫外线、重金属和NO等诱导产生高水平的表达, HO1也称之为热休克蛋白32（HSP32），是目前研究多的一种同工酶。相对分子质量为32000，染色体定位22q12，在细胞中定位于微粒体，诱导性表达于肝、脾、心、肺、血管平滑肌、脑等组织，诱导因素为应激、缺氧、内毒素、过氧化氢、重金属、紫外线、细胞因子、生长因子等。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的*洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

试剂配制:
1、人血红素加氧酶1Elisa Kit说明书酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。
2、标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
注意事项：
1加样：
①人血红素加氧酶1Elisa Kit说明书实验样本过多时，可分批次操作，以减少实验时间延长造成的误差；
②加酶试剂后，用吸水纸吸干孔外试剂；
③作定量试验时，使用加样器加注试剂，并经常校正其准确性，此外，要做到一份样本一个移液头，防止交叉污染。
2.温育：
①如有两种温度，尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件；
②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察；
③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”，因此尽量采用水浴；
3.洗板：
①手工洗板时，拍板时要垂直，避免交叉污染，用力不能过猛，防止抗原抗体复合物脱离；
②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅，若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出；
③为了洗涤效果好，实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法，在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次，或适当增加洗板的次数；
4.显色：
ELISA试剂盒中，如以四甲基联苯胺(TMB)为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以邻苯二胺(OPD)为底物，则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂，要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光，但A、B液应尽量避免接触金属器械。
5.判定：
读取结果要在15-30 min内完成，定性测定用肉眼判读试验结果时，反应板应水平距离白色背景10-15 cm；定量测定时用酶标仪读取结果，酶标仪不应置于阳光或强光照射下，需先预热15-30 min再进行测试。
​现货供应　谷丙转氨酶(ALT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　谷丙转氨酶2(ALT2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　谷光甘肽合成酶(GSS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　谷光甘肽合成酶(GSS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　谷光甘肽合成酶(GSS)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　谷氧还蛋白(GLRX)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　原钙黏素15(PCDH15)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　原钙黏素15(PCDH15)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　原钙黏素17(PCDH17)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　原钙黏素18(PCDH18)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　原钙黏素19(PCDH19)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　原钙黏素20(PCDH20)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　畸胎瘤衍生生长因子1(TDGF1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　Ⅹ型胶原(COL10)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　拓扑异构酶Ⅰ(*)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　叶酸受体1(FOLR1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　聚集蛋白聚糖(AGC)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T

现货供应　B-细胞激活因子(BAFF)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　规格：　48T/96T
人血红素加氧酶1Elisa Kit说明书内毒素清除亲和介质4℃保存Endotoxin Removal Resin现货供应

内毒素清除亲和介质4℃保存Endotoxin Removal Resin现货供应

内皮细胞生长因子-20℃保存Growth Factor For Cell Culture现货供应

尼龙膜，13×20 cm常温Nylon Membrane现货供应

尼龙膜，13×20 cm常温保存Nylon Membrane (Pharmacia)现货供应

鸟苷室温保存Guanosine现货供应

鸟类种属鉴定PCR Mix(线粒体CO1基因）-20℃保存Animal DNA Barcoding PCR Mix现货供应

鸟嘌呤4℃保存Guanin    现货供应

尿道上皮细胞生长因子-20℃保存Growth Factor For Cell Culture现货供应

尿苷室温干燥保存Uridine现货供应

尿苷 -5'- 二磷酸-20℃保存（UDP）Uridine 5′-Diphosphate现货供应
操作步骤：
1）人血红素加氧酶1Elisa Kit说明书运用前，将所有试剂充沛混匀。不要使液体发生很多的泡沫，防止加样时参加很多的气泡，发生加样上的差错。
2）依据待测样品数量加上规范品的数量决议所需的板条数。每个规范品和空白孔主张做复孔。每个样品依据自个的数量来定，能运用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后参加50ul于反响孔内。
3）参加稀释好后的规范品50ul于反响孔、参加待测样品50ul于反响孔内。当即参加50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，悄悄振动混匀，37℃温育1小时。
4）甩去孔内液体，每孔加满洗刷液，振动30秒，甩去洗刷液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗刷，洗刷次数添加一次。
5）每孔参加80ul的亲和链酶素-HRP，悄悄振动混匀，37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体，每孔加满洗刷液，振动30秒，甩去洗刷液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。假如用洗板机洗刷，洗刷次数添加一次。
7）每孔参加底物A、B各50ul，悄悄振动混匀，37℃温育10分钟。防止光照。
8）取出酶标板，敏捷参加50ul停止液，参加停止液后应当即测定成果。
9）在450nm波利益测定各孔的OD值。