非小细胞肺癌细胞：NCI-H358 返回列表页

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商品介绍：

使用方法：

收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

3. 细胞传代

1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入*培养液终止消化；

3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的*培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；

4) 待细胞*贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。

培养操作：

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

人 HCST / DAP10 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 LRP11 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 FAM171B / KIAA1946 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 AGA / ASRG / Aspartylglucosaminidase 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 Statherin / STATH 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 TMUB2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)

人 SUSD4 / Sushi domain-contain

非小细胞肺癌细胞：NCI-H358 Goat Anti-Chicken IgG/Gold  胶体金标记的羊抗鸡IgG 规格: 0.5ml

SMARCA1/SNF2L  解旋SNF2L抗体 规格: 0.2ml

FSTL5  卵泡抑素相关蛋白5抗体 规格: 0.2ml

PG-C/Pepsinogen 2  胃蛋白原C抗体 规格: 0.1mlCK19  细胞角蛋白19抗体 规格: 0.1ml

EP3  前列素E受体3抗体 规格: 0.1mlCCDC75  卷曲螺旋结构域蛋白75抗体 规格: 0.2ml

RAB2/RAB2A  ras基因家族Rab2抗体 规格: 0.2ml

TRPM2  瞬时受体电位离子通道蛋白/M亚家族抗体 规格: 0.2ml

FAM3B/PANDER  胰衍生因子抗体 规格: 0.2mlPRDX2/Peroxiredoxin-SO3  硫氧还蛋白过氧化物2 规格: 0.2ml

IL-4R/CD124  白细胞介素4受体抗体IL-4Rα 规格: 0.1ml

ANKRD20A3  锚蛋白重复结构域蛋白20A3抗体 规格: 0.2ml

TSPAN15/NET-7  四分子交联体15抗体（四旋蛋白） 规格: 0.2ml

NGB/neuroglobin  脑红蛋白/神经红蛋白/神经球蛋白抗体 规格: 0.1mlRAB6C  RAS基因相关蛋白Rab6C抗体 规格: 0.2ml