乳腺癌细胞/黑素瘤细胞：MDA-MB-435S 返回列表页

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商品介绍：

使用方法：

收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

3. 细胞传代

1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入*培养液终止消化；

3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的*培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；

4) 待细胞*贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。

培养操作：

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

食蟹猴 ANGPT1 基因全长ORF克隆

大鼠 TGFB3 基因全长ORF克隆

大鼠 BMP3 基因全长ORF克隆

大鼠 ERBB4 基因全长ORF克隆

大鼠 EPHB2 基因全长ORF克隆

大鼠 EPHA4 基因全长ORF克隆

大鼠 EPHB6 基因全长ORF克隆

大鼠 BMP10 基因全长ORF克隆

大鼠 BMP7 基因全长ORF克隆

大鼠 TGFB2 基因全长ORF克隆

乳腺癌细胞/黑素瘤细胞：MDA-MB-435S 50次 T7体外转录试剂盒 T7 in vitro Transcription Kit -20℃保存

20Ku 脲 ( 尿素 巨豆 ) Urease(Jack Bean) 4℃保存

2 ug pSUPERIOR.puro pSUPERIOR.puro 低温运输，-20℃保存

phospho-ALK/CD246(Tyr1278/1282/1283)  磷酸化间变型激抗体 规格: 0.1ml

SLC39A11  溶质载体家族39成员11抗体 规格: 0.2ml

Rabbit anti-MG IgG/Cy7  Cy7标记的兔抗爪沙鼠IgG 规格: 0.1ml

phospho-MEK2(Ser226)  磷酸化丝裂原活化蛋白激激2抗体 规格: 0.1ml

CK18  细胞角蛋白18抗体 规格: 0.1ml

FAIM1  FAS凋亡抑制分子1抗体 规格: 0.2ml

Ephrin A3/EFNA3  蛋白激A3受体抗体 规格: 0.1ml

Mouse Anti-human IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的小鼠抗人IgM 规格: 0.1mlEndomucin  内皮粘蛋白EMCN抗体 规格: 0.2ml

Gephyrin  桥尾蛋白抗体 规格: 0.1mlMRG15  转录调控因子MRG15抗体 规格: 0.2ml