当前位置:上海谷研实业有限公司>>生化检测试剂盒>>辅酶Ⅰ系列>> 乙醛脱氢酶(ALDH)紫外分光光度法
货号 | GOY-01S6348 |
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操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。
商品属性:
产品名称 | |
规格 | 50管/48样 |
检测方法 | 紫外分光光度法 |
货号 | GOY-01S6348 |
商品介绍:
测定意义
乙醛脱氢酶 (EC 1.2.1.10)是醛脱氢酶的一种,广泛存在于各种动物、植物和微生物体内。主要作用是将乙醛氧化成乙酸,在酒精代谢中起主要作用。在人类和许多动物体内,线粒体乙醛脱氢酶能把对生物体有害的醇类转化,所以在细胞解毒研究中乙醛脱氢酶受到高度关注;同时,乙醛脱氢酶在分子生物学以及相关疾病的检测方面有较广泛的研究应用。
测定原理
在辅酶Ⅰ存在的条件下,乙醛脱氢酶催化乙醛和NAD+转化为乙酸和NADH,在340nm处的吸光值会增加,测定340nm处的吸光值变化,可计算得到乙醛脱氢酶的活性。
自备实验用品及仪器
天平、离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、蒸馏水。
实验方法学:
一、肝素的配制: 市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液样本的收集: 全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。 1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。 2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA。 |
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
O-甲基-L- 98%菌唑 分析标准品,98.5%Rabbit Anti-human IgA/HRP 辣根过氧化物标记兔抗人IgA
L-蛋甲酯盐酸盐 98%除草标准溶液 100μg/ml,u=4%Rabbit Anti-monkey IgG/HRP 辣根过氧化物标记兔抗猴IgG
D-蛋 99%除草标准溶液 10μg/ml,u=5%Rabbit Anti-monkey IgM/HRP 辣根过氧化物标记兔抗猴IgM
1-甲基-L-组 98%灭菌丹标准溶液 100μg/ml,u=2%Rabbit Anti-mouse IgG/HRP 辣根过氧化物标记兔抗小鼠IgG
L-天冬酰甲酯盐酸盐 98%灭菌丹标准溶液 10μg/ml,u=6%Rabbit Anti-mouse IgM/HRP 辣根过氧化物标记兔抗小鼠IgM
N'-甲基-L-组甲酯 98%烟嘧磺隆 95%Rabbit Anti-pig IgG/HRP 辣根过氧化物标记兔抗猪IgG
Fmoc-N-甲基-D-亮 97%恶草酮 分析标准品,97.5%Rabbit Anti-pig IgM/HRP 辣根过氧化物标记兔抗猪IgM
N-Boc-D-蛋 98%恶草酮标准溶液100μg/ml,u=2%,溶剂:酮Rabbit Anti-rat IgG/HRP 辣根过氧化物标记兔抗大鼠IgG
乙醛脱氢酶(ALDH)紫外分光光度法环己烯酯 98%Anti-CRHR2/CRFR2 促皮质释放激素受体2抗体人Smad同源物7 (Smad7/MADH7)联免疫吸附测定试剂盒
环己烯酯 ≥98%, FCC, FGAnti-CSIG 衰老抑制因抗体人Sp100核抗原(Sp100)联免疫吸附测定试剂盒
杨梅 98%Anti-Cripto-1(NT) 畸胎瘤衍化生长因子抗体(N端)人STAT蛋白抑制因子1(PIAS1)联免疫吸附测定试剂盒
丁酯 95%Anti-Cripto-1 畸胎瘤衍化生长因子抗体(C端)人STAT蛋白抑制因子3(PIAS3)联免疫吸附测定试剂盒
龙脑 55%Anti-CSMD1 CSMD1抗体人原钙黏素β16(PCDHβ16)联免疫吸附测定试剂盒
(+)- 分析标准品,≥98% (GC)Anti-CRTAM CRTAM抗体人V型胶原α2(COL5α2)联免疫吸附测定试剂盒
桂油 FCCAnti-CSP 环子孢子蛋白(约氏疟原虫)抗体人S抗原(SAG)联免疫吸附测定试剂盒
小豆蔻油 FCCAnti-C-SKI/v-SKI C-SKI抗体人TH糖蛋白(THP)联免疫吸附测定试剂盒
香茅 98%Anti-Calcitonin 降钙素抗体人43KDa Tar DNA结合蛋白(TDP43)联免疫吸附测定试剂盒
香芹酚 99%Anti-Calcitonin 降钙素抗体人TATA结合蛋白(TBP)联免疫吸附测定试剂盒
2-环戊环戊酮 97%Anti-CTBP1 C端结合蛋白1抗体人TATA框结合蛋白/TBP相关因子(TAF)联免疫吸附测定试剂盒
肉桂 97%Anti-CT DNA (calf thymus DNA) 小牛胸腺DNA 抗体人TATA框结合蛋白相关因子1(TAF1)联免疫吸附测定试剂盒
己 97%Anti-CTGF 结缔组织生长因子抗体人TATA框结合蛋白相关因子2(TAF2)联免疫吸附测定试剂盒
正己 standard for GC, ≥99.0% (GC)Anti-CD150/SLAM 信号淋巴活化分子CD150抗体人TATA框结合蛋白相关因子13(TAF13)联免疫吸附测定试剂盒
己 ≥97%, FCC, Kosher, FGAnti-CD151/MER2/PETA-3 CD151抗体人微管关联蛋白(MAPτ)联免疫吸附测定试剂盒
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