当前位置:上海谷研实业有限公司>>生化检测试剂盒>>辅酶Ⅰ系列>> 乙醇脱氢酶(ADH)紫外分光光度法
货号 | GOY-01S6342 |
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操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。
商品属性:
产品名称 | |
规格 | 50管/48样 |
检测方法 | 紫外分光光度法 |
货号 | GOY-01S6342 |
商品介绍:
测定意义
ADH是生物体内短链醇代谢的关键酶,催化乙醇与乙醛可逆转换,在很多生理过程中起着重要作用。哺乳动物ADH主要在肝脏生成,肝脏损伤导致ADH释放到血清中。血清ADH活性高低反映了肝功能是否异常。
测定原理:
ADH催化NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+,NADH在340nm处有吸收峰,而NAD+没有;测定340nm 吸光度下降速率,来计算ADH活性。
自备仪器和用品:
研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1ml石英比色皿、可调式移液器和双蒸水。
实验方法学:
一、肝素的配制: 市售肝素冻干粉140单位/mg,1克瓶装,每瓶140,000单位,称取0.1克肝素冻干粉,加生理盐水5ml,配成2800单位/ml。取50~100μl湿润管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不会凝固。老鼠血易凝固,所以最好更浓一些。可以取0.1克肝素冻干粉,加3ml生理盐水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。 肝素抗凝管的制备:取0.1克肝素冻干粉,加2.5ml生理盐水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,湿润管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),横向转动,每隔5~10分钟转动一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。 | 二、血液样本的收集: 全血根据收集的条件,分成不抗凝和抗凝两种。同时,不抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血清;抗凝分离出的上层黄色的液体我们称之为血浆。 1、不抗凝收集血清:将收集好的全血,静置1~2小时,直接低速离心分离出血清待用或保存。 2、抗凝收集血浆: 收集抗凝全血,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接低速离心分离血浆(也可静置半小时左右再低速离心分离血浆)待用或保存。根据不同抗凝剂的性能特征,选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA。 |
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后
用于测定。
二甲基双十八烷基氯化铵 97%2-苯基 98%Anti-MIP-3 Beta/ELC/CCL19/FITC 荧光素标记巨噬炎性蛋白3β 抗体IgG
N-乙基-N-(3-磺基)-3-甲氧基苯钠盐 99%1,3-二(4-氨苯氧基)苯 98%Anti-MIP4/CCL18/FITC 荧光素标记巨噬炎症蛋白4抗体IgG
十六烷基二甲基乙基 98%2-基吡 98%Anti-Midnolin isoform Protein 1/FITC 荧光素标记中脑核仁蛋白1抗体IgG
N-乙基-N-(3-磺基)-3-钠盐 98%对苯甲酸叔丁酯 98%Anti-Midnolin isoform Protein 2/FITC 荧光素标记中脑核仁蛋白2抗体IgG
N-乙基-N-(2-羟基-3-磺基)-3-甲氧基苯钠盐 99%3,5-二三氟甲苯 98%Anti-MIF /FITC 荧光素标记巨噬移动抑制因子抗体IgG
N-乙基-N-(3-磺基)苯钠盐 99%4-叔丁基环己 98%Anti-MITF/FITC 荧光素标记小眼相关转录因子抗体IgG
2-乙基己氧基 99%间三氟甲苯 99%Anti-Mitofilin/IMMT /FITC 荧光素标记线粒体内膜蛋白抗体IgG
固蓝B 90%2-乙酰吡 98%Anti-MK(Midkine) 荧光素标记中期因子/肝素结合生长因子抗体IgG
乙醇脱氢酶(ADH)紫外分光光度法聚乙二单 平均分子量1000鸡可溶性间粘附分子1(sICAM-1)免疫试剂盒酰肽受体3抗体(脂氧素A4受体)MAPKAP Kinase 2 丝裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗体
酐 98%鸡可溶性E选择素(sE-selectin)免疫试剂盒兜蛋白抗体MAPK4 丝裂原活化蛋白激4抗体
1,3- 98%鸡抗人IgM antibody 免疫试剂盒脂肪堆积和肥胖相关蛋白抗体MAPK13/SAPK4/p38delta 丝裂原活化蛋白激13抗体
氢氧化 AR,90%鸡抗人IgG antibody 免疫试剂盒核苷交换因子FARP2抗体MAPK11/p38Beta 丝裂原活化的蛋白激p38β抗体
结晶碳 CP,98%鸡抗人IgA antibody 免疫试剂盒FK506结合蛋白相关蛋白抗体(他克莫司相关蛋白)MAPK organizer 1/Morg1 丝裂原活化蛋白激组织蛋白1抗体
三钠 97%鸡抗Ⅲ(AT-Ⅲ)抗体免疫试剂盒成纤维生长因子受体1原癌因伴侣蛋白抗体MAP-9 微管相关蛋白9抗体
丁二酐 AR,98%鸡抗链球菌溶血素O(ASO)抗体(IgM)免疫试剂盒钙粘蛋白家族成员7抗体MAP7D1/RPRC1 精氨/脯氨富含卷曲蛋白1抗体
丁二 AR,99.5%鸡抗链球菌溶血素O(ASO)抗体(IgG)免疫试剂盒Ⅲ型纤维连接蛋白域蛋白2/5抗体MAP65/ASE 1 拟南芥MAP65蛋白抗体
氢氧化钠 AR,96%鸡抗肌内膜抗体IgA(EMA IgA)免疫试剂盒细丝蛋白A抗体MAP4K6/MINK1 丝裂原活化蛋白激MAP4K6抗体
氢氧化钠 GR,97%,片状鸡巨噬替代激活相关化学因子1(AmAC-1)免疫试剂盒化细丝蛋白A抗体MAP4K4 丝裂原活化蛋白激MAP4K4抗体
三 AR,99.0%鸡窖蛋白Caveolin-1(CAV1)免疫试剂盒化细丝蛋白A抗体MAP4K1 造血祖激1抗体
三 测序鸡降钙素(CT)免疫试剂盒DNA损伤修复因XRCC9抗体MAP4 微管相关蛋白4抗体
三 for HPLC, ≥99.5% (GC)鸡碱性成纤维生长因子(bFGF)免疫试剂盒化细丝蛋白A抗体MAP3K9 丝裂原活化蛋白激3K9抗体
三 for LC-MS, ≥99.5%鸡状腺素(T4)免疫试剂盒化神经膜抗体MAP3K8/TPL2 丝裂原活化蛋白激激8抗体
三酐(TFAH) 衍生级 (for GC), ≥99.0% (GC)鸡状旁(PTH)免疫试剂盒化碱性成纤维生长因子受体1抗体MAP3K7IP3 NFKB激活蛋白1抗体
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