原代细胞污染处理流程

原代细胞污染处理流程
1、将污染的培养液倒掉，转烧瓶口，加入10 mlPBS，适当晃动清洗培养瓶，然后倒掉。转烧瓶口。

2、继续加入10mlPBS，同样方法晃动，清洗培养瓶，然后倒掉。

3、继续加入5mlPBS，同样方法洗瓶，主要是培养面，然后倒掉。

4、重复步骤3再洗。

5、重复步骤3再洗。

6、加入3-5ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。

7、原代细胞加入3ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。

8、再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。

9、加入10ml培养液，加入2ml双抗，放置培养箱培养，5小时之后，倒掉培养基，加入PBS洗瓶两次，然后加入胰酶消化，吹打后置于离心机800-1000r/min离心，然后洗一次。置于新的培养瓶里培养，培养体系加入2ml双抗。

10、24h之后，视情况换液，若仍然污染严重，培养基浑浊，重复以上步骤，若看不到污染物，则继续步骤1)、3）、4）、6）、8），然后加入培养液培养，培养体系加入2ml双抗。

11、24h之后，若仍污染严重，可再重复一次，若还污染只能弃之（不过一般没有出现这种情况），若镜下不见污染物，则换液PBS洗瓶，原代细胞正常培养。