血细胞的分离技术操作方法2017/3/2

（一）材料与试剂1．抗凝剂（1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其钠盐或钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白，从而阻止血液凝固。常用的肝素溶液浓度为1000U/ml，市...

ATCC细胞培养方法分析2017/2/28

1.ATCC细胞玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上;2.无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净,紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;...

细胞培养过程中预防污染可从以下几方面着手2017/2/23

（一）细胞系从操作者做起1、操作者责任心要强，要细心稳重，操作技术要熟练。进无菌室前要用肥皂洗手或用5%新洁尔灭浸泡5分钟，按规定穿隔离衣。进入后关好门，坐下来尽量少走动。工作开始要先用75%酒精棉球...

原代细胞体外培养细胞的分型2017/2/21

原代细胞体外培养细胞的分型（一）原代细胞贴附型：大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞，大致分成以下四型：1、成纤维细胞型：胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。除真...

脂质体介导DNA转染技术分析2017/2/16

脂质体介导DNA转染技术分析脂质体介导是目前条件下Z方便的转染方法之一，适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，其转染率高，优于磷酸钙法，比它高5～100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞株。用L...

胰蛋白酶溶液的配制方法与消毒2017/2/14

胰蛋白酶溶液的配制方法与消毒胰蛋白酶的作用是使细胞系间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37...

SHG-44细胞的转染操作方法2017/2/9

SHG-44细胞的转染操作方法(1)转染当天，加入脂质体/DNA混合物之前的短时间内，更换1ml新鲜的有血清或无血清培养基。(2)准备不同比例的DOSPER/DNA混合物，以确定每个细胞系的比例。①溶...

正常肺细胞培养操作方法2017/2/7

正常肺细胞培养操作方法取出小鼠细胞系正常肺组织,在预冷的PBS液中尽量除去气管、支气管、血管组织,将小鼠肺组织上面的血污用PBS清洗后,剪成1mm3小块,用0.25%的胰酶溶液清洗一次,继续用0.25...

细胞株免疫组化染色基本技术及注意事项2017/1/24

细胞株免疫组化染色基本技术及注意事项①根据课题的内容选用动物，选用配套的Ab。如Ab-I鼠抗人的抗体，细胞株与其他种属间无交叉，则不能用其他动物，而且Ab-Ⅱ必须是羊抗鼠，若PAP法Ab-Ⅲ必须来源于...

原代细胞周期测定操作步骤2017/1/21

原代细胞周期测定操作步骤[实验器材]1．仪器原代细胞倒置显微镜，CO2培养箱，普通冰箱，超净工作台，低速冷冻离心机，显微数码摄影系统．水浴锅。2．材料与试剂(1)非无菌材料酒精棉球，离心管架，血细胞计...

原代细胞传代培养法操作注意事项2017/1/19

原代细胞传代培养法操作注意事项原理原代细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用...

细胞减数分裂的具体过程2017/1/17

细胞减数分裂的具体过程这种原代细胞分裂形式是随着配子而出现的，凡是进行有的动、植物都有减数分裂过程。减数分裂与正常的有丝分裂的不同点，在于减数分裂时进行2次连续的核分裂，细胞分裂了2次，其中染色体只分...

细胞株培养的基本技术2017/1/12

细胞株培养的基本技术为了减少污染对细胞培养的影响，必须建立细胞冻存库。当需要做实验时从主细胞库中复苏细胞建立工作细细胞株库。每一个冻存标本都应明确记录细胞的性质、代数及有无污染。同时还应建立规范的检测...

原代细胞悬液标本制备实验步骤2017/1/10

原代细胞悬液标本制备实验步骤(1)取材：原代细胞收集对数生长期细胞于离心管中，800～1000r／min离心10min，弃上清，弹指法混匀细胞。沿管壁加入2．0％～2．5％冷戊二醛，轻轻吹打，4℃固定...

原代细胞培养的优化方法2017/1/5

原代细胞培养的优化方法1)选用密度的健康细胞细胞的汇合度应为40–80%，并且传代次数较低(比如小于50次)，即细胞不可太老。随着时间的推移，相对于较早传代的细胞，培养原代细胞的表型和生长特性通常会呈...